Induzione e Monitoraggio adottivi di ipersensibilità ritardata nei ratti

Summary

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata da CCR7-memoria T effettrici (TEM) linfociti. Qui mostriamo come attivare antigene-specifiche cellule TEM, inducono DTH adottivi nei ratti Lewis e monitorare la risposta infiammatoria.

Abstract

Ipersensibilità di tipo ritardato (DTH) è una reazione infiammatoria mediata dai linfociti memoria CCR7-T effettrici che si infiltrano nel sito di iniezione di un antigene contro il quale il sistema immunitario è stato innescato. La reazione infiammatoria è caratterizzata da arrossamento e gonfiore nel sito di uno stimolo antigenico. Si tratta di un modello pratico per determinare l'efficacia in vivo di immunosoppressori. DTH cutanea può essere indotta in seguito a trasferimenti adottivo di antigene-specifica dei linfociti T o per l'immunizzazione attiva con un antigene, e la successiva sfida intradermica con l'antigene per indurre la reazione infiammatoria della pelle in una zona determinata. Risposte DTH può essere indotto a vari antigeni, per l'ovoalbumina esempio, tubercolina, tossoide tetanico, o hemocyanin patelle buco della serratura. Tali reazioni possono anche essere indotta contro autoantigene, ad esempio per proteina basica della mielina (MBP) nei ratti con encefalomielite autoimmune sperimentale indotta con MBP, un modello animale di sclerosi multipla (1). Qui mostriamo come per indurre una risposta adottiva DTH nei ratti Lewis. Per prima cosa stimolare ovalbumina specifiche cellule T in vitro e iniettare queste cellule attivate via intraperitoneale a ratti ingenuo. Dopo che permette alle cellule di equilibrare in vivo per 2 giorni, ci sarà una sfida per i topi con ovalbumina nel padiglione di un orecchio, mentre l'altro orecchio wil ricevono soluzione salina. La reazione infiammatoria sarà visibile 3-72 ore dopo l'orecchio e lo spessore sarà misurato come indice di gravità DTH.

Protocol

1. La stimolazione del ovalbumina specifici dei linfociti T Riposo ovalbumina specifiche cellule T vengono stimolati con ovalbumina in presenza del combustibile irraggiato timociti di ratto Lewis (30 Gy) come cellule presentanti l'antigene (APC), in media stimolazione (Preparare in DMEM + Pen / Strep / L-Glut + + NEAA RPMI Vitamine + + 2ME Rat Siero + ovoalbumina, alle concentrazioni finale indicato nella lista dei materiali.) Rat preparazione del siero <l…

Discussion

La sfida antigenico può essere eseguita anche in altri siti, ad esempio nella pelle della schiena (2). Noi però scoprire che impegnativo. Utilizzando il padiglione dell'orecchio, come mostrato in questo video, permette per la misurazione più precisa della reazione DTH.

Materials

Material Name	Type	Company	Catalogue Number	Comment
DMEM		Gibco/Invitrogen	12430-062	500ml
Sodium pyruvate		Sigma	S8636	1 mM final, in Stimulation medium
Penicillin – Streptomycin – L-Glutamine		Cambrex/BioWhittaker	17-718R	100 u/ml – 100 µg/ml – 4 mM respectively, final, in Stimulation Medium
Non essential amino acids		Sigma	R7131	NEAA, 1% final, in Stimulation Medium
RPMI vitamins		Sigma	R7256	1% final, in Stimulation medium
beta-mercaptoethanol		Sigma	M6250	2ME, 50 µM final, in Stimulation Medium
Syngeneic rat serum				1% final. See explanation in Protocol.
Ovalbumin		Sigma	A5503	10 µg/ml final, in Stimulation Medium.