동물 실험은 분할한 수의학 사무소 (스위스 취리히)에 의해 승인되었습니다. 주택 및 실험 절차는 스위스 동물 보호법에 따라되었고 과학적인 목적 (유럽 의회 및 2010년 9월 22일의위원회의 지침 2010/63/EU)에 사용 동물의 보호에 관한 유럽 지침을 따릅니다. 1. 사전 수술 고려 1.1 마우스 : 주택 요건 일반 조건 및 상태 모니터링 이것은 공급 업체에서 배달 또는 외부 쥐 식민지에서 전송 쥐가 최소 2 주 전에 수술 주택 시설에 도착하는 것이 좋습니다. 이 기간은 동물이 새로운 환경 및 설비 특정 주택 조건에 적응할 수 있도록해야합니다. 마우스는, 사회 생활 동물이 적응 기간 동안 호환 그룹에서 지내게 될 것입니다. 의 개인의 수준을 모니터링음식과 물 소비, 각 마우스는 수술 송신기 주입 후 십일까지 수술 전 삼일에서 단독으로 보관되어 있습니다. telemetric – 송신기 베어링 마우스 설립을위한 시간 라인은 그림 1에 표시됩니다. 그것은 동물이 건강하고 상태 수술 온 것이 중요합니다. 따라서 수술 전에 동물의 일반 상태에 관한 2-3 일동안은 하루에 한 번씩 모니터 (외모, 자세, 자발적인 행동)뿐만 아니라 체중, 음식과 물을 소비한다. 이러한 데이터는 일반적인 상태와 전반적인 건강과 웰빙의 개별 기준 레벨을 설정하기 위해 의료 기록 (일반 상태와 건강 모니터링 데이터 시트, 표 1)에 설명되어 있습니다. 수술 전 질병이나 장애 일반적인 조건의 증상을 나타내는 동물 실험에서 제외되어야합니다. 수술하기 전에 하루에 1.2 헤어 클리핑 anim를 면도하기 위하여 사전에 주입하는 일,수술 ALS는 마우스는 순수 산소 (600 ML / 분)에서 (5 %) sevoflurane (8 %) 또는 isoflurane을 사용하여 소형 (8x8x8cm) Perspex 챔버에 anesthetized 간략하게됩니다. righting 반사 손실 후, 마우스가 벗어나는 촬영하고 목 앞쪽에과 복부 머리는 지느러미 드러누움에 누워 동물 잘린이며 마취는 sevoflurane 3~4% 또는 코 마스크로 약 5 분 동안 유지됩니다 600 ML / 분의 유량에서 순수 산소 isoflurane 1.5-3 %. 머리를 클리핑 후, 동물은 각성 수 있으며 그들의 홈 케이지로 이동됩니다. 2. 심기 2.1 운영 환경, telemetric 송신기의 준비 이식의 날, 송신기 준비와 수술에 관한 모든 절차는 수술 현미경이 장착된 층류 후드와 함께 작업 벤치에서 실시하고 있습니다. 무균 조건 autoclaved기구의 사용에 의해 보장하는엔트 및 소독 재료와 작업 벤치 7 소독하여. 이전 이식하는 telemetric 송신기는 (ETA – F10, 데이터 과학 국제, 세인트 폴, MN, 미국) 첫번째 준비가되어 있습니다. 자신의 무균 패키지에서 제거 후, 송신기의 리드는 이식하는 마우스의 크기에 적합한 길이로 단축됩니다. 성인 outbred 또는 근친 생쥐의 대다수에서 빨간색 전극은 약 42mm 약 55mm의 길이로 흰색 / 무색 전극으로 단축 수 있습니다. 절연 튜브가 리드의 말초 (감각) 부분에서 제거됩니다 : 튜브의 약 20mm가 붉은 전극에서 제거됩니다, 튜브 약 10mm는 화이트 / 무색 전극에서 제거됩니다. 각 전극의 말초 부분 (튜브없이 지금있는) 얇은 실크 봉합 (PERMA – Handseide, 6 대 0으로 Ethicon, Norderstedt, 독일)와 끝부분을 고정하여 루프로 형성됩니다. 전극을 준비 후, 송신기는 워싱턴에 배치됩니다동물이 anesthetized 및 수술 준비되었을 때 이식 준비 RM 멸균 식염수. 2.2 아나스타샤 50~10분에서 전에 흡입 마취의 유도, midazolam (4 밀리그램 / kg)과 펜타 닐 (0.04 밀리그램 / kg)의 혼합물 따라서 진정 작용과 사전 emptive 진통제를 제공 premedication으로 subcutaneously 관리하고 있습니다. 일반적인 흡입 마취가 유도 챔버에있는 동물을 배치하고 휘발성 마취제를 (순수 산소 600 ML / 분에 sevoflurane 8% 또는 isoflurane 5 %) 도입에 의해 유발됩니다. 동물이 그것이 층류 흐름 후드 아래에있는 작업 벤치로 전송하고, 마취 장치에서 코 마스크와 튜브가 장착되어 특별히 고안된 금속 접시에 지느러미 드러누움에 배치됩니다 righting 반사 손실을 보여줍 때. 마취는 자발 호흡 (600 ML / 분의 유량에서 sevoflurane 3~4% 또는 순수 산소 isoflurane 1.5-3 %)에 의해 유지됩니다. 마취, 동물의 눈 동안들 연고 (비타민 A, Baush & Lomb, Steinhausen, 스위스)로 보호됩니다. 금속 접시에 누워있는 동안 동물이 물 목욕 가열 표면으로 따뜻하게합니다 (39 ° C + / -1) 작업 벤치의. 2.3 외과 목 앞쪽에 및 복부의 피부는 70 % 에탄올로 소독합니다. 1 – 피부에 1.5 – cm 길이의 절개는 복부에 중간선을 따라 낮은 흉부에서 이루어집니다. 부정 (무색 / 흰색) 리드는 흉부의 작은 절개가 (≤ 0.5 ㎝) 세로 방향으로 만든 목에에 subcutaneously tunnelled 있습니다. 피부와 기본 조직은 전극의 와이어 루프의 고정을위한 공간을 만들기 위해 준비가되어 있습니다. 와이어 루프는 (PERMA – Handseide, 6 대 0으로 Ethicon, Norderstedt, 독일) 2 얇은 실크 봉합을 사용하여기도의 오른쪽에있는 근육 사이에 고정됩니다. 목에있는 상처가 나서 (VICRYL 6 대 0으로 Ethicon, Norderstedt 흡수성 봉합과 폐쇄, 독일) 레이어 인치 복벽은 다음 linea 알바에 개설되고 telemetric 송신기의 본문은 마우스의 복강에 위치합니다. 긍정적인 (적색) 전극의 와이어 루프는 그것이 간과 왼쪽 상단 복부에있는 횡경막 (그림 2) 사이에 자리잡고 것과 같은 방식으로 비단 봉합과 검상 돌기 처리 봉합합니다. 그 다음, 복부의 근육의 레이어는 흡수성 봉합 (VICRYL 6 대 0으로 Ethicon, Norderstedt, 독일)와 폐쇄됩니다. 마지막으로 복부 벽, Sulfadoxin과 트리 메소 프림의 혼합물을 닫기 전에 [(각각 30 밀리그램 / kg, 6 MG / kg; 식염수 1 ML (0.9 %)에 약 체온 (38-39 ° C)에서 해산] 안티 infective의 예방을 목적으로 복강에 주입하고 액체 항상성를 지원합니다. 마지막으로, 복부의 피부 스테이플 (정밀, 3 M 의료, 세인트 폴, MN, 미국)와 함께 복원됩니다. 3. 포스트 수술 치료 수술과 마취의 완료 후, 0.1 MG / buprenorphine의 kg (Temgesic, 에섹스 케미 AG, 루체른, 스위스)와 5 밀리그램 / meloxicam의 kg이 (Metacam, Boehringer Ingelheim, 바젤, 스위스) 통증 치료를 위해 subcutaneously 관리이며, 동물에 남아있는 따뜻한 (39 ° C + / -1) 약 2 시간에 대한 복구 작업 벤치의 표면. 함께 통증 (회 : buprenorphine, 0.1 MG / kg 및 meloxicam 5 밀리그램 / kg)로, 300 μL 포도당 (5 %) 및 신체 온도 예열 300 μL 식염수 (0.9 %) 구성 지원 치료는 subcutaneously 두 번 적용됩니다 4 일간 매일. 추가 복구 지원을 위해, 그것은 추가로 마시는 병이 15 % 포도당 용액을 포함하는으로 동물을 제공하는 가치입니다. 40~10일의 복구 기간 동안, 그것은 동물이 따뜻한 보관하는 것이 좋습니다. 따라서, 우리의 경우, 생쥐는 온난 캐비닛 안에 보관되어 아르 (30 ° C + / – 1). 로 일반적인 상태와 체중의 모니터링물론 음식과 물 소비 등 사후 operatively 10 일간의 일반 상태와 건강 모니터링 데이터 시트 (표 1)에 따라 하루에 한 번씩 수행됩니다. 인간 종점은 복구의 진행이 만족스럽지 않은 경우 불필요한 고통과 고통을 피하기 위해 동물의 희생을 즉, 다음과 같은 조건에서 실현됩니다 : 가난한 일반적인 상태에서, 동물 (감동 / 밀고 후에없이 운동) 크게 무감 각한이며 신체 표면 온난에도 불구하고 차가운 느낌 즉 경우, 동물은 즉시 euthanatized해야합니다. 일 4 송신기 주입 후, 동물 무관심의 명백한 징후를 보여주는 경우, 매우 공격하거나 음식 섭취량을 표시하지 않습니다, 그것은 즉시 euthanatized해야합니다. 일 8 송신기 주입 후, 동물 앞의 포스트 수술 일에 비해 체중의 명확한 증가를 표시할 수 있습니다. 또한, 그것은 리터에 소비한다동쪽 미리 수술 일일 식품 섭취량의 80 %. 이러한 조건 중 하나가 충족되지 않은 경우, 동물은 즉시 euthanatized해야합니다. 이식 후 10 일 동안, 동물은 표준 주택 조건 하에서 동물의 방으로 전송됩니다. 생쥐는 사회적 상호 작용을 허용하고 읽기 밖으로 후속 실험 8, 9에 상당한 영향을 미칠 수있는 장기적인 개별 주택의 악영향을 방지하기 위해 호환 그룹에 보관되어 있어야합니다. 마우스는 송신기 주입 후 첫 실험이 실시하고 데이터 수집이 시작되기 전에 최소한 4 주 convalescence 기간이 있어야합니다. 4. 데이터 수집 트랜스 미터가 켜져있다 뭘로 데이터 수집 장치는 자석으로 동물을 만져 시작됩니다. 데이터 퀘스트 ART 소프트웨어 (데이터 과학 국제, 세인트 폴, MN, 미국) 감지, 수집, 분석 및 GR을 조정하나 이상의 동물에서 신호 aphical 프레 젠 테이션 (파도 양식의 형태로). 취득 프로그램은 데이터 교환 매트릭스 (데이터 과학 국제)를 통해 변환기와 수신기에서 컴퓨터로 전송 데이터 신호를 수집합니다. 이 프로그램도 지속적으로 정기적으로 또는 샘플에서 시간의 특정 길이의 데이터를 수집하고 컴퓨터의 하드 드라이브에 데이터를 저장할 수 있습니다. 배출 신호의 범위와 품질이 물질은 새장 조성과 주변 기기 (예 : 금속 대 플라스틱)에 강하게 의존으로, 그것은 아래 예 수신기 플레이트가 가능한 동물에 가까운 위치 것이 좋습니다 동물의 케이지 또는 실험 공간, 예를 들어 실험실 벤치 또는 밟아 돌리는 바퀴 위에서. 그것은 기록 및 데이터 전송 시스템의 정확한 구성 연속 샘플링 모드에서 실시간으로 측정 짧은 검사하여 확인하는 것이 좋습니다. 데이터 수집 및 저장되고 나면, 그들은 음모를 수테드, 나열 및 분석 프로그램을 사용하여 다른 매개 변수의 다양한 분석했다. 기록 시스템 (예 : 샘플링이 modus 정의) 및 분석 소프트웨어 (심장 박동의 변화 매개 변수, ECG / biopotential 곡선에서 설립 PQ 간격 및 QT 간격 등)의 구성의 세부 사항은 제조 업체의 설명서에서 찾을 수 있습니다. telemetric 데이터 수집과 해석에 대한 유용한 생체 계획 및 통계 방법에 대한 유용한 힌트가 다른 세 게시됩니다. 5. 대표 결과 : 설명 절차의 전체 구조는 그림 1에 표시됩니다. 심장 (1 리드 ECG)에서 biopotentials을 얻기위한 전극의 위치를 포함하여 이식 송신기의 위치는 그림 2에 표시됩니다. 단기 biopotential 곡선 (1 리드 ECG) 및 장기 심장 박동, 핵심 체온과 개인의 활동 전위의 녹음에서 원시 데이터의 예생쥐는 각각 그림 3과 그림 4에 부여됩니다. 그림 5는 실험 후 생쥐의 그룹으로 장기간 측정에서 게시된 데이터의 예제를 제공합니다. 몇 가지 다른 매개 변수는 biopotentials 곡선에서 설정할 수 있습니다. 심장 박동의 변화 매개 변수를 5, QT 간격 및 PQ 간격 10 프레 젠 테이션 사례는 11 곳에 게시됩니다. 표 1. 일반 조건 및 건강 모니터링 데이터 시트. 시트를 다운로드하려면 여기를 클릭하십시오. 이 템플릿은 각각 마우스의 일반 상태 및 건강 모니터링을 용이하게합니다. 동물의 모양, 자세, 그리고 자발적인 행동뿐만 아니라 체중 결정, 그리고 음식과 물을 소비의 기준 시험은 3 일간 하루에 한 번씩 주입 수술하기 전에 설정해야합니다. 얻은 사람들과 기본적인 결정의 비교매일 10 일 동안 수술 후 게시할 수술 복구의 진행을 평가하기 위해 제공하고 있습니다. 또한, 사후 수술 치료 및 통증 치료가 잘 의료 기록의 형태로 설명되어 있습니다. 인간 종점에 대한 지침은 마우스가 동물이 주입 후 빠른 회복을위한 기준을 충족하지 않을 경우 불필요한 통증과 고통을 방지하기 위해 희생해야하는지 여부에 대한 결정을 촉진하기 위해 부여됩니다. 그림 1. telemetric – 송신기 베어링 마우스를 설립 일정. 마우스 실험 및 데이터 수집에 사용할 수있는 시점에 포인트를 보여주는 송신기의 주입에 관한 절차의 순서. 이식 telemet의 그림 2. 방사선 / 스케치 표시 위치스피 송신기. 송신기의 본문은 복강에 위치합니다. 긍정적인 리드는 와이어 루프에 형성과 봉합과 칼 모양의 프로세스에 고정됩니다. 부정적인 리드가 목에 흉부에서 subcutaneously 터널링 및 기관에 직접 옆에있는 근육 사이의 와이어 루프로 고정됩니다. 방사선은 실험실 동물 9 저자 '이전 책자에서 가져온 것입니다. 그림 3. Biopotential 곡선. 의식 마우스와 함께 sevoflurane 흡입 마취하에 같은 동물 중 하나를 리드 ECG 곡선의 원시 인쇄. 심장 박동은 원격 시스템에 의해 자동으로 계산됩니다. 마취 기록 3 초 시퀀스는 440 BPM의 심장 박동수를 나타냅니다. 의식 마우스에 기록된 곡선 모드 동안 심장 박동에 대한 예상 범위 내의 폭포 660 BPM의 심장 박동을 보여줍니다정리 또는 식사와 같은 속도로 신체 활동. biopotential / 한 리드 ECG 곡선, 심장 박동의 변화 매개 변수, interbeat 간격 및 PQ 및 QT 간격에서 제조 업체의 소프트웨어의 사용과 설치하실 수 있습니다. 그림 4. 건강하고 병에 걸린 생쥐의 장기 측정에서 원시 데이터입니다. 생쥐가 사람이나 실험 절차에서 어떤 소란도없이 그들의 가정 케이지 개별적으로 보관되어있는 동안 심장 박동 (BPM), 핵심 체온 (° C)와 전위의 활동은 (카운트) 측정됩니다. 심장 박동 삼십초 매 5 분 (주파수 1,000 Hz에서 샘플링)에 기록됩니다. 핵심 체온은 십초 매 5 분 샘플입니다. 전위의 활동은 지속적으로 기록 5 분 간격으로 저장됩니다. 다섯 분 데이터 포인트가 6.5 일 동안 추적하고 있습니다. telemetric 성능은 다양한 세 생쥐에서 기록됩니다신체 조건. 건강한 마우스 생리 가치와 어둠 (밤) 단계 동안 전위의 활동 동작에서 정상적인 증가와 함께 명확 circadian 리듬을 보여줍니다. 대조적으로, 주요 수술 후 심장 박동 특히 일광 단계에 증가하고, 전위의 활동은 우울합니다. 세 번째 마우스 평평하게 나타나는 심장 박동 및 핵심 체온의 만성 질환 – 종양의 circadian 리듬의 고통, 그리고 전위의 활동은 줄어들 수 있습니다. 심장 박동 측정의 대표 데이터 (정상 값 및 주요 수술 후)는 Altex 12 저자 '이전 발행물에서 가져옵니다. 그림 5. 실험 후 장기적인 원격 측정에서 결과의 프레 젠 테이션의 예제는. 수치는 실험실 동물 1 저자 '이전 책자에서 가져온 것입니다. 모범적인 실험 50 분 isofl으로urane 또는 sevoflurane 마취이 수행되었다. 동물 후 심장 박동, 핵심 체온과 전위의 활동에 anesthetics의 장기적인 영향은 깨어 비교있었습니다. 를 사용하여 16 송신기 – 이식 동물이 단일 보관되어 및 홈 케이지에서 자유롭게 로밍 허용 동안 마우스, telemetric 데이터가 마취마다 팔 생쥐에 기록되었다. 장기 postanesthetic 효과 분석을 위해, 우리는 쥐가 주로 밤에 활성화되므로 값은 24 – H 사이클 동안 크게 다르다는 점을 고려했다. 따라서, 각 동물에 대한 telemetric 값의 의미는 밤 (12 H 어두운)과 일 (12 H 조명) 단계에 대해 별도로 계산되었다. 개인의 일반적인 값은 전에 마취에 대한 3 일간의 수단을 계산하여 설립되었다. 마취 후 매일 들어, 어둡고 밝은 단계의 의미는 델타 값의 결과로, 개인의 정상적인 가치와 비교했다. 따라서 델타 값 (이전 설립 정상 값의 편차를 나타냅니다해당 12 H 밤낮 시간에서) 마취합니다. 열 여덟 생쥐에서 의미를 나타냅니다 막대는 표준 편차를 나타냅니다. 별표는 의미를 나타내는 P ≤ 0.05에서 (정상 값과 마취 후 '는 4 일간의 각 그룹의 의미 비교를위한 분산 편도 분석).