Summary

Использование Доступное Светодиодные массивы для фото-стимуляция нейронов

Published: November 15, 2011
doi:

Summary

Взрослый родившихся нейронов выражения ChR2 можно манипулировать в ломтик электрофизиологических подготовку для того, чтобы изучить их вклад в функцию обонятельных нейронных цепей.

Abstract

Стандартный электрофизиологии срез позволил исследователям зонда отдельных компонентов нервной системы путем записи электрических ответов одиночных клеток в ответ на электрические или фармакологических 1,2 манипуляций. С изобретением методов оптического контроля генетически целевых нейронов (optogenetics), исследователи теперь имеют беспрецедентный уровень контроля над конкретными группами нейронов в стандартной подготовки срез. В частности, светочувствительной channelrhodopsin-2 (ChR2) позволяет исследователям для активации нейронов с 3,4 свет. Объединив осторожны калибровки светодиодных фотостимуляцией ChR2 со стандартными электрофизиологии ломтик, мы в состоянии зонд с более подробно роль взрослого родился интернейронов в обонятельной луковице, первый центральный реле обонятельной системы. Использование вирусного выражение ChR2-YFP специально у взрослых родившихся нейронов, мы можем выборочно контролировать молодых взрослых родился нейронов в среде старыхг зрелых нейронов. Наши оптические управления использует простые и недорогие светодиодные системы, и мы покажем, как эта система может быть откалиброван, чтобы понять, сколько света необходимо, чтобы вызвать пики активности в отдельных нейронов. Таким образом, короткие вспышки голубого света могут удаленно контролировать стрельбу структуры ChR2-трансдуцированных новорожденных клеток.

Protocol

1. Оптический калибровки: измерение LED Power Прикрепить светодиодов на радиатор с активным охлаждением с помощью вентилятора и закрепить этот светодиод / радиатор aparatus к коллимирующей линзы. Замените лампы, используемые в светлое освещение с LED / радиатор / вентилятор / объектив …

Discussion

В последние годы наблюдается взрыв популярности инструментов optogenetic в области нейронаук 6. В результате, становится все более важным снизить барьер входа для лабораторий, желающих, чтобы начать использовать эти новые инструменты. Здесь мы опишем, как проводить простую и низкой ст…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

Эта работа была поддержана компания по страхованию жизни "AG2R-La-Mondiale», Школе нейронаук Парижской (ЕПС), Национальное агентство по La Recherche "ANR-09-NEUR-004" в рамках "ERA-NET NEURON "7РП программы Европейской комиссии и Пастера Foundation. Себастьян Вагнера была поддержана Letten Foundation.

Materials

Material Type Company Catalogue No.
Ketamine 100 mg/ml Imalgène 1000  
Xylazine 2% Rompun  
NaCl &nbps; Sigma S5886
KCl   Sigma P5405
MgSO4   Sigma M1880
NaHCO3   Sigma S5761
NaHPO4   Sigma S5011
Glucose   Sigma G7021
CaCl2   Sigma C7902
Agarose   Sigma A9539
Pipette Puller P-97 Sutter  
Glass Capillaries 1.5 mm O.D./1.17 mm I.D. Harvard Apparatus GC150T-10
LED array   Bridgelux BXRA-C2000
Collimating lens 40 mm beam diameter Thor Labs LEDC1
Power supply 2.8 amp A1W Electronik HKO2800
Optical power meter   Thor Labs PM 100
Heatsink Silent Boost K8 Thermaltake A1838
Fan Silent Boost K8 Thermaltake A1838
Vibratome   Leica VT1200S

References

  1. Nissant, A. Adult neurogenesis promotes synaptic plasticity in the olfactory bulb. Nature Neuroscience. 12, 728-730 (2009).
  2. Apicella, A. Pyramidal Cells in Piriform Cortex Receive Convergent Input from Distinct Olfactory Bulb Glomeruli. Journal of Neuroscience. 30, 14255-14260 (2010).
  3. Boyden, E. S. genetically targeted optical control of neural activity. Nature. 8, 1263-1263 (2005).
  4. Bardy, C. where new inhibitory neurons release neurotransmitters in the adult olfactory bulb. The Journal of Neuroscience. 30, 17023-17034 (2010).
  5. Grubb, M. S. Functional maturation of the first synapse in olfaction: development and adult neurogenesis. The Journal of neuroscience. 28, 2919-2932 (2008).
  6. Zhang, F. Circuit-breakers: optical technologies for probing neural signals and systems. Nature reviews. Neuroscience. 8, 577-581 (2007).
  7. Grossman, N. Multi-site optical excitation using ChR2 and micro-LED array. Journal of neural engineering. 7, 16004-16004 (2010).
  8. Dhawale, A. K. Non-redundant odor coding by sister mitral cells revealed by light addressable glomeruli in the mouse. Nature neuroscience. 13, 1404-1412 (2010).
  9. Weick, J. P. Functional control of transplantable human ESC-derived neurons via optogenetic targeting. Stem cells. 28, 2008-2016 (2010).
  10. Toni, N. Neurons born in the adult dentate gyrus form functional synapses with target cells. Nature Neuroscience. 11, 901-907 (2008).
  11. Grubb, M. S., Burrone, J. Channelrhodopsin-2 Localised to the Axon Initial Segment. PLoS ONE. 5, e13761-e13761 .
  12. Tye, K. M. Amygdala circuitry mediating reversible and bidirectional control of anxiety. Nature. 471, 358-362 (2011).

Play Video

Cite This Article
Valley, M., Wagner, S., Gallarda, B. W., Lledo, P. Using Affordable LED Arrays for Photo-Stimulation of Neurons. J. Vis. Exp. (57), e3379, doi:10.3791/3379 (2011).

View Video