Ons protocol legt uit hoe meerdere eiwitten gels gieten in een tijd van recycling Invitrogen Nupage Novex MiniGel cassettes, en goedkope materialen die zijn aangeschaft bij een bouwmarkt te vinden. Deze voordelige gestroomlijnd werkwijze omvat een manier om de gels bewaren bij 4 ° C gedurende enkele weken. Door hergebruik van kunststof gel cassettes uit de handel verkrijgbare gels, laboratoria dat frequent eiwit gels draaien kan besparen aanzienlijke kosten en help het milieu.
Abstract
De evaluatie van eiwitten met natriumdodecylsulfaat-polyacrylamide-gelelektroforese (SDS-PAGE) analyse een techniek die door biochemie en moleculaire biologie onderzoekers 1-4. Voor laboratoria die de dagelijkse analyses van eiwitten uit te voeren, kunnen de kosten van in de handel verkrijgbare polyacrylamidegels (~ $ 10/gel) aanzienlijk zijn in de tijd. Om deze kosten te beperken, sommige onderzoekers bereiden hun eigen polyacrylamide gels. Traditionele methoden van het gieten van deze gels meestal gebruik maken van gespecialiseerde apparatuur en glas gel platen die kunnen duur zijn en weg te gieten veel gels en op te slaan voor toekomstig gebruik. Bovendien kan de behandeling van glazen platen bij het schoonmaken of gel gieten resulteren in een onvoorziene breuk het creëren van een gevaar voor de veiligheid, waarin het gebruik ervan kan zich verzetten tegen in undergraduate laboratorium klassen. Ons protocol legt uit hoe meerdere eiwitten tegelijk gels giet door recycling Invitrogen Nupage Novex MiniGel cassettes, en goedkoop materialen gekocht bij een bouwmarkt te vinden. Deze voordelige gestroomlijnd werkwijze omvat een manier om de gels bewaren bij 4 ° C gedurende enkele weken. Door hergebruik van kunststof gel cassettes uit de handel verkrijgbare gels, laboratoria dat frequent eiwit gels draaien kan besparen aanzienlijke kosten en help het milieu. Daarnaast plastic gel cassettes zijn uitermate bestand tegen breuk, waardoor ze ideaal zijn voor undergraduate laboratorium klaslokalen.
Protocol
1. Voorbereiden van de cassettes Schoon voor-en achterkant platen van een gebruikte Invitrogen Nupage Novex MiniGel cassette, of andere commerciële MiniGel cassette. Bereid ongeveer 1-3 ml kunststof epoxy en meng goed volgens de instructies van de fabrikant. Breng de epoxy aan de binnenzijde van de voorplaat, waarbij de beide platen in aanraking komen, wanneer de cassette is gemonteerd. Schuif een stuk filtreerpapier of karton door de bodem spleet van de achterplaat montage van …
Discussion
Protein gel electroforese een onmisbaar methode voor de meeste laboratoria moleculaire biologie. In de handel verkrijgbare minigels bieden een hoge mate van gemak, maar kan kostbaar zijn. Hier laten we zien hoe de MiniGel cassettes van een populair merk in de handel verkrijgbare minigels opnieuw te gebruiken. Deze methode houdt het gemak van een kant en klaar bron van gels, maar een fractie van de kosten van commercieel beschikbare minigels. Een belangrijke stap in de procedure wordt de toepassing van de juiste hoeveelh…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
De auteurs danken de Howard Hughes Medical Institute voor een UF Science for Life Award voor AH
Materials
Name of reagent
Company
Catalogue number
Comments
Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm)
Invitrogen
NC2010
Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells
Plastic Epoxy
Loctite
108771
Electrical Tape
Scotch
125 mL side arm flask
Pyrex
5360
4X Tris-Base resolving gel buffer
1.5 M Tris-base pH 8.7
acrylamide
Fisher Scientific
01065-500
Bis-acrylamide
MP Biomedicals, Inc.
800173
30.8% acrylamide solution
30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O
10% APS
Fisher Scientific
BP179-25
0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use
TEMED
Arcos Organics
138450500
1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer
5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer
4X Tris-Base stacking gel buffer
1.5 M Tris-base pH 6.8
Gel comb
Invitrogen
NC3015
15 well, 1.0 mm thickness
Impulse Sealer
TEW Electric Heating Equipment
Heat Sealable Pouch
Kapak/Scotchpak
1 pint size (6.5″ x 8″)
Gel storage buffer
1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide
Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X)
Invitrogen
LC2676
DTT
FisherBiotech
BP172-5
10X Tris-Gylcine Running buffer
Invitrogen
LC2675
1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS
Hwang, A. C., Grey, P. H., Cuddy, K., Oppenheimer, D. G. Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes. J. Vis. Exp. (60), e3465, doi:10.3791/3465 (2012).