Vores protokol viser, hvordan man hælde flere proteingeler ad gangen ved genbrug Invitrogen Nupage Novex minigel kassetter og billige materialer, der indkøbes på et hjem forbedring butik. Dette økonomiske og strømlinet Fremgangsmåden indbefatter en måde at opbevare gelerne ved 4 ° C i nogle få uger. Ved genbrug af plastic gelkassetter fra kommercielt tilgængelige geler, laboratorier, der kører hyppige proteingeler kan spare betydelige omkostninger og hjælpe miljøet.
Abstract
Evaluering af proteiner under anvendelse af natriumdodecylsulfat-polyacrylamidgelelektroforese (SDS-PAGE-analyse) er en almindelig teknik ved biokemiske og molekylærbiologiske forskere 1-4. For laboratorier, som udfører daglige analyser af proteiner, kan omkostningerne ved kommercielt tilgængelige polyacrylamidgeler (~ $ 10/gel) være betydeligt med tiden. For at mindske denne omkostning, nogle forskere forberede deres egne polyacrylamidgeler. Traditionelle metoder til at hælde disse geler typisk anvender specialudstyr og glas gel plader, der kan være dyrt og udelukker hælde mange geler og gemme dem til senere brug. Derudover kan håndtering af glasplader under rengøring eller gel hælde resultere i utilsigtet brud skabe en sikkerhedsrisiko, som kan udelukke deres anvendelse i bachelor laboratorie klasser. Vores protokol viser, hvordan man hælde flere proteingeler samtidig ved genbrug Invitrogen Nupage Novex minigel kassetter, og billig marialer købt på et hjem forbedring butik. Dette økonomiske og strømlinet Fremgangsmåden indbefatter en måde at opbevare gelerne ved 4 ° C i nogle få uger. Ved genbrug af plastic gelkassetter fra kommercielt tilgængelige geler, laboratorier, der kører hyppige proteingeler kan spare betydelige omkostninger og hjælpe miljøet. Desuden er plast gelkassetterne ekstremt modstandsdygtige over for beskadigelse, hvilket gør dem ideelle til undergraduate laboratorie klasseværelser.
Protocol
1. Forberedelse af kassetter Ren og bagpladerne af anvendes Invitrogen Nupage Novex minigel kassette eller andre kommercielle minigel kassette. Forberede omkring 1-3 ml af plast epoxy og bland godt i overensstemmelse med producentens instruktioner. Anvende epoxy til den indvendige kant af den forreste plade, hvor de to plader vil komme i kontakt, når kassetten er samlet. Glide et stykke filtrerpapir eller karton gennem bunden slids bagpladen ved montering af kassetten for at for…
Discussion
Protein gelelektroforese er en uundværlig fremgangsmåde til fleste molekylærbiologiske laboratorier. Kommercielt tilgængelige minigelerne sikre et højt niveau af bekvemmelighed, men kan være dyrt. Her viser vi, hvordan man genbruge de minigel kassetter fra et populært mærke af kommercielt tilgængelige minigelerne. Denne fremgangsmåde bevarer bekvemmelighed har en færdiglavet kilde geler, men en brøkdel af omkostningerne ved kommercielt tilgængelige minigeler. Et vigtigt trin i denne procedure anvender den k…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne takker Howard Hughes Medical Institute for UF videnskab for Life pris til AH
Materials
Name of reagent
Company
Catalogue number
Comments
Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm)
Invitrogen
NC2010
Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells
Plastic Epoxy
Loctite
108771
Electrical Tape
Scotch
125 mL side arm flask
Pyrex
5360
4X Tris-Base resolving gel buffer
1.5 M Tris-base pH 8.7
acrylamide
Fisher Scientific
01065-500
Bis-acrylamide
MP Biomedicals, Inc.
800173
30.8% acrylamide solution
30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O
10% APS
Fisher Scientific
BP179-25
0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use
TEMED
Arcos Organics
138450500
1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer
5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer
4X Tris-Base stacking gel buffer
1.5 M Tris-base pH 6.8
Gel comb
Invitrogen
NC3015
15 well, 1.0 mm thickness
Impulse Sealer
TEW Electric Heating Equipment
Heat Sealable Pouch
Kapak/Scotchpak
1 pint size (6.5″ x 8″)
Gel storage buffer
1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide
Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X)
Invitrogen
LC2676
DTT
FisherBiotech
BP172-5
10X Tris-Gylcine Running buffer
Invitrogen
LC2675
1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS
Hwang, A. C., Grey, P. H., Cuddy, K., Oppenheimer, D. G. Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes. J. Vis. Exp. (60), e3465, doi:10.3791/3465 (2012).