Verser et exécution d'un gel de protéine en réutilisant Cassettes commerciaux
Summary
Notre protocole montre comment verser gels de protéines multiples à la fois par le recyclage Invitrogen cassettes NuPAGE MiniGel Novex, et des matériaux peu coûteux achetés dans un magasin de rénovation domiciliaire. Cette méthode économique et rationalisé comprend un moyen de stocker les gels à 4 ° C pendant quelques semaines. En réutilisant les cassettes de gel en plastique à partir de gels disponibles dans le commerce, les laboratoires qui exécutent des gels de protéine fréquents peuvent réduire les coûts importants et aider l'environnement.
Abstract
L'évaluation des protéines à l'aide de sodium dodécyl polyacrylamide gel de sulfate de l'électrophorèse (SDS-PAGE) l'analyse est une technique couramment utilisée par les chercheurs en biologie moléculaire et de biochimie 1-4. Pour les laboratoires qui effectuent des analyses quotidiennes de protéines, le coût de gels de polyacrylamide disponibles dans le commerce (~ $ 10/gel) peuvent être considérables au fil du temps. Pour atténuer ce coût, certains chercheurs à préparer leurs propres gels de polyacrylamide. Les méthodes traditionnelles de verser ces gels utilisent généralement l'équipement spécialisé et des plaques de gel de verre qui peuvent être coûteux et s'oppose versant gels de nombreuses et de les stocker pour une utilisation future. En outre, la manipulation de plaques de verre pendant le nettoyage ou le gel versant peut se traduire par un bris accidentel de créer un danger pour la sécurité, ce qui peut empêcher leur utilisation dans les classes de premier cycle en laboratoire. Notre protocole montre comment verser gels de protéines multiples simultanément par recyclage Invitrogen cassettes NuPAGE MiniGel Novex, et peu coûteux mariaux achetés à un magasin de rénovation domiciliaire. Cette méthode économique et rationalisé comprend un moyen de stocker les gels à 4 ° C pendant quelques semaines. En réutilisant les cassettes de gel en plastique à partir de gels disponibles dans le commerce, les laboratoires qui exécutent des gels de protéine fréquents peuvent réduire les coûts importants et aider l'environnement. En outre, cassettes de gel en plastique sont extrêmement résistants à la rupture, ce qui les rend idéal pour les salles de classe en laboratoire de premier cycle.
Protocol
Discussion
Électrophorèse sur gel des protéines est une méthode indispensable pour les laboratoires de biologie moléculaire les plus. Minigels disponibles dans le commerce de fournir un niveau élevé de confort, mais peuvent être coûteux. Ici, nous montrons comment réutiliser les cassettes MiniGel à partir d'une marque populaire de minigels disponibles dans le commerce. Cette méthode conserve la commodité d'avoir une source prête à l'emploi de gels, mais à une fraction du coût de minigels disponibles da…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier l'Institut médical Howard Hughes pour une science UF pour l'attribution de la vie à AH
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
