Unser Protokoll zeigt, wie mehrere Proteingele zu einer Zeit, gießen durch Recycling Invitrogen NuPAGE Novex Minigel Kassetten und kostengünstige Materialien zu einem Baumarkt gekauft. Dieses wirtschaftliche und optimierte Verfahren umfasst einen Weg, um die Gele bei 4 ° C lagern für ein paar Wochen. Durch die Wiederverwendung der Kunststoff-Gel-Kassetten aus kommerziell erhältlichen Gelen, Labors, die häufige Proteingele laufen können erhebliche Kosten sparen und die Umwelt schonen.
Abstract
Die Auswertung der Proteine mit Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese (SDS-PAGE-Analyse) ist eine gängige Technik der Biochemie und Molekularbiologie Forscher 1-4 verwendet. Für Laboratorien, die täglich Analyse von Proteinen führen, können die Kosten für im Handel erhältliche Polyacrylamidgelen (~ $ 10/gel) beträchtlich sein im Laufe der Zeit. Um diese Kosten zu mindern, bereiten einige Forscher ihre eigenen Polyacrylamidgelen. Traditionelle Methoden der Ausgießen dieser Gele verwenden üblicherweise spezialisierte Ausrüstung und Glas-Gel-Platten, die teuer und schließt Gießen viele Gele und speichert sie für eine zukünftige Verwendung kann. Darüber hinaus kann der Handhabung von Glasplatten bei der Reinigung oder Gel in Gießen versehentlichem Bruch schafft ein Sicherheitsrisiko darstellen, was ihren Einsatz in Labor Undergraduate-Klassen ausschließen kann zur Folge haben. Unser Protokoll zeigt, wie mehrere Proteingele gleichzeitig gießen Recycling von Invitrogen NuPAGE Novex Minigel Kassetten, und preiswert maMaterialien gekauft zu einem Baumarkt. Dieses wirtschaftliche und optimierte Verfahren umfasst einen Weg, um die Gele bei 4 ° C lagern für ein paar Wochen. Durch die Wiederverwendung der Kunststoff-Gel-Kassetten aus kommerziell erhältlichen Gelen, Labors, die häufige Proteingele laufen können erhebliche Kosten sparen und die Umwelt schonen. Darüber hinaus sind Kunststoff Gelkassetten extrem bruchfest, was sie ideal für Bachelor-Labor Klassenzimmer macht.
Protocol
1. Vorbereitung der Kassetten Saubere Vorder-und Rückseite eines gebrauchten Platten Invitrogen NuPAGE Novex Minigel Kassette, oder andere Geschäfte Minigel Kassette. Bereiten Sie etwa 1-3 ml Kunststoff Epoxy und gut mischen nach Anweisungen des Herstellers. Anwenden das Epoxidharz auf die Innenkante der Frontplatte, wobei die beiden Platten in Berührung kommen wird, wenn die Kassette montiert ist. Schieben ein Stück Filterpapier Papier oder Karton durch den Bodenschlitz der …
Discussion
Protein-Gel-Elektrophorese ist eine unverzichtbare Methode für die meisten molekularbiologischen Laboratorien. Im Handel erhältliche Minigelen bieten ein hohes Maß an Komfort, sondern kann teuer werden. Hier zeigen wir, wie man die Wiederverwendung der Minigel Kassetten aus einer populären Marke im Handel erhältliche Minigelen. Dieses Verfahren hält die Einfachheit eines vorgefertigten Quelle von Gelen, aber nur einen Bruchteil der Kosten für im Handel erhältliche Minigelen. Ein wichtiger Schritt in diesem Verfa…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren danken dem Howard Hughes Medical Institute für eine UF Science for Life Award an AH
Materials
Name of reagent
Company
Catalogue number
Comments
Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm)
Invitrogen
NC2010
Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells
Plastic Epoxy
Loctite
108771
Electrical Tape
Scotch
125 mL side arm flask
Pyrex
5360
4X Tris-Base resolving gel buffer
1.5 M Tris-base pH 8.7
acrylamide
Fisher Scientific
01065-500
Bis-acrylamide
MP Biomedicals, Inc.
800173
30.8% acrylamide solution
30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O
10% APS
Fisher Scientific
BP179-25
0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use
TEMED
Arcos Organics
138450500
1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer
5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer
4X Tris-Base stacking gel buffer
1.5 M Tris-base pH 6.8
Gel comb
Invitrogen
NC3015
15 well, 1.0 mm thickness
Impulse Sealer
TEW Electric Heating Equipment
Heat Sealable Pouch
Kapak/Scotchpak
1 pint size (6.5″ x 8″)
Gel storage buffer
1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide
Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X)
Invitrogen
LC2676
DTT
FisherBiotech
BP172-5
10X Tris-Gylcine Running buffer
Invitrogen
LC2675
1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS
Hwang, A. C., Grey, P. H., Cuddy, K., Oppenheimer, D. G. Pouring and Running a Protein Gel by reusing Commercial Cassettes. J. Vis. Exp. (60), e3465, doi:10.3791/3465 (2012).