घनघोर और वाणिज्यिक कैसेट reusing द्वारा एक प्रोटीन जेल रनिंग
Summary
हमारे प्रोटोकॉल को दर्शाता है कैसे रीसाइक्लिंग Invitrogen Nupage NOVEX minigel कैसेट, और कम खर्चीली सामग्री एक घर सुधार की दुकान में खरीदा द्वारा एक समय में कई प्रोटीन जैल डाल. यह किफायती और सुव्यवस्थित विधि 4 डिग्री सेल्सियस पर एक कुछ हफ्तों के लिए जैल की दुकान भी शामिल है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जैल, प्रयोगशालाओं कि अक्सर प्रोटीन जैल चलाने से प्लास्टिक जेल कैसेट फिर से का उपयोग करके महत्वपूर्ण लागत बचाने के लिए और पर्यावरण की मदद कर सकते हैं.
Abstract
प्रोटीन का मूल्यांकन dodecyl सोडियम सल्फेट polyacrylamide जेल विश्लेषण वैद्युतकणसंचलन (एसडीएस पेज) का उपयोग एक आम तकनीक जैव रसायन और आणविक जीव विज्ञान 1-4 शोधकर्ताओं द्वारा प्रयोग किया जाता है. प्रयोगशालाओं है कि प्रोटीन की दैनिक विश्लेषण करने के लिए, व्यावसायिक रूप से उपलब्ध polyacrylamide जैल (~ 10/gel डॉलर) की लागत पर काफी समय हो सकता है. इस लागत को कम करने के लिए, कुछ शोधकर्ताओं ने अपने स्वयं के polyacrylamide जैल तैयार करते हैं. इन जैल घनघोर के पारंपरिक तरीकों आमतौर पर विशेष उपकरणों और गिलास जेल प्लेटें कि महंगा हो सकता है और कई जैल डालने के लिये और उन्हें भविष्य के उपयोग के लिए भंडारण रोकना कर सकते हैं का उपयोग. इसके अलावा, सफाई या जेल में डालने का कार्य के दौरान गिलास प्लेट की हैंडलिंग आकस्मिक टूटना एक सुरक्षा के लिए खतरा है, जो स्नातक प्रयोगशाला कक्षाओं में उनके उपयोग छीन कर सकते हैं बनाने में परिणाम कर सकते हैं. हमारा प्रोटोकॉल दर्शाता है कि कैसे कई प्रोटीन जैल डाल करने के लिए एक साथ रीसाइक्लिंग Invitrogen Nupage NOVEX minigel कैसेट के द्वारा, और सस्ती माterials एक घर सुधार की दुकान पर खरीदा है. यह किफायती और सुव्यवस्थित विधि 4 डिग्री सेल्सियस पर एक कुछ हफ्तों के लिए जैल की दुकान भी शामिल है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध जैल, प्रयोगशालाओं कि अक्सर प्रोटीन जैल चलाने से प्लास्टिक जेल कैसेट फिर से का उपयोग करके महत्वपूर्ण लागत बचाने के लिए और पर्यावरण की मदद कर सकते हैं. इसके अलावा, प्लास्टिक जेल कैसेट अत्यंत टूटना है, जो उन्हें स्नातक प्रयोगशाला की कक्षाओं के लिए आदर्श बनाता है के लिए प्रतिरोधी रहे हैं.
Protocol
Discussion
प्रोटीन जेल वैद्युतकणसंचलन सबसे आणविक जीव विज्ञान प्रयोगशालाओं के लिए एक अनिवार्य विधि है. व्यावसायिक रूप से उपलब्ध minigels सुविधा के एक उच्च स्तर प्रदान करते हैं, लेकिन महंगा हो सकता है. यहां हम बताते है?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखकों मुख्यालय हॉवर्ड ह्यूजेस मेडिकल इंस्टीट्यूट जीवन पुरस्कार के लिए एक UF विज्ञान के लिए धन्यवाद
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
