Helle og kjøre en Protein Gel ved å gjenbruke Kommersielle Kassetter
Summary
Vår protokoll demonstrerer hvordan du helle flere protein geler gangen ved gjenvinning Invitrogen Nupage Novex minigel kassetter og billige materialer kjøpt på et hjem forbedring butikken. Dette økonomiske og strømlinjeformet metode inkluderer en måte å lagre gels ved 4 ° C i noen uker. Ved gjenbruk av plast gel kassettene fra kommersielt tilgjengelige geleer, laboratorier som kjører hyppige protein geler kan spare betydelige kostnader og hjelpe miljøet.
Abstract
Evalueringen av proteiner ved hjelp av natrium dodecyl sulfat polyakrylamid gelelektroforese (SDS-PAGE) analyse er en vanlig teknikk som brukes av biokjemi og molekylærbiologi forskere 1-4. For laboratorier som utfører daglige analyser av proteiner, kan kostnadene for kommersielt tilgjengelige polyakrylamid geler (~ $ 10/gel) være betydelig over tid. Å redusere denne kostnaden, noen forskere utarbeider sine egne polyakrylamid geler. Tradisjonelle metoder for å helle disse gels typisk utnytte spesialisert utstyr og glass gel plater som kan være dyrt og utelukker helle mange geleer og lagre dem til senere bruk. Videre kan håndtering av glassplater under rengjøring eller gel helle resultere i utilsiktet brudd skape en sikkerhetsrisiko, som kan utelukke bruken i undergraduate laboratoriet klasser. Vår protokoll demonstrerer hvordan du helle flere protein geler samtidig ved gjenvinning Invitrogen Nupage Novex minigel kassetter, og billig materials kjøpt på et hjem forbedring butikken. Dette økonomiske og strømlinjeformet metode inkluderer en måte å lagre gels ved 4 ° C i noen uker. Ved gjenbruk av plast gel kassettene fra kommersielt tilgjengelige geleer, laboratorier som kjører hyppige protein geler kan spare betydelige kostnader og hjelpe miljøet. I tillegg plast gele kassetter er ekstremt motstandsdyktig mot brudd, noe som gjør dem ideelle for undervisning laboratoriet klasserom.
Protocol
Discussion
Protein elektroforese er en uunnværlig metode for de fleste molekylærbiologiske laboratorier. Kommersielt tilgjengelige minigels gi en høy grad av brukervennlighet, men kan være kostbart. Her viser vi hvordan du gjenbruke de minigel kassettene fra en populær merkevare av kommersielt tilgjengelige minigels. Denne metoden beholder bekvemmeligheten av å ha et ferdig kilde gels, men til en brøkdel av prisen av kommersielt tilgjengelige minigels. Et viktig steg i denne prosedyren er å bruke riktig mengde epoxy å ful…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Forfatterne takker Howard Hughes Medical Institute for en UF Science for Life pris til AH
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
