Ticari kasetleri yeniden kullanılmasıyla Dökme ve Protein Jel Koşu
Summary
Bizim protokolü bir ev geliştirme mağazasından satın dönüşüm Invitrogen Nupage Novex minigel kaset ve ucuz malzemeler ile aynı anda birden fazla protein jelleri dökün gösterilmiştir. Bu ekonomik ve akıcı yöntemi, birkaç hafta süreyle 4 ° C'de jeller depolamak için bir yöntem içerir. Piyasada satılan jeller, sık sık protein jeller çalıştırmak laboratuarlarından plastik jel kasetleri yeniden kullanarak önemli maliyet tasarrufu ve çevre yardımcı olabilir.
Abstract
Sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE) analizi ile proteinlerin değerlendirilmesi biyokimya ve moleküler biyoloji araştırmacılar 1-4 tarafından sıkça kullanılan bir tekniktir. Proteinlerin günlük analizleri gerçekleştirmek için laboratuar, ticari olarak mevcut poliakrilamid jel (~ $ 10/gel) maliyetini önemli bir zaman içinde olabilir. Bu maliyeti azaltmak için, bazı araştırmacılar kendi poliakrilamid jelleri hazırlamak. Bu jellerin dökme Geleneksel yöntemler genellikle özel ekipman ve pahalı olması ve birçok jeller dökme ve gelecekteki kullanım için saklama engel olabilir cam jel plakları kullanmaktadır. Ayrıca, döküm temizleme veya jel sırasında cam plakalar ele lisans laboratuvar derslerinde kendi kullanılmasına engel olabilir, bir güvenlik tehlikesi yaratmak, kazaen kırılması neden olabilir. Bizim protokolü geri dönüşüm Invitrogen Nupage Novex minigel kasetleri aynı anda birden fazla protein jelleri dökün, ve ucuz ma gösteren nasılterials bir ev geliştirme mağazasından satın. Bu ekonomik ve akıcı yöntemi, birkaç hafta süreyle 4 ° C'de jeller depolamak için bir yöntem içerir. Piyasada satılan jeller, sık sık protein jeller çalıştırmak laboratuarlarından plastik jel kasetleri yeniden kullanarak önemli maliyet tasarrufu ve çevre yardımcı olabilir. Ayrıca, plastik jel kasetleri lisans laboratuar sınıfları için ideal hale getiriyor kırılması, son derece dayanıklıdır.
Protocol
Discussion
Protein jel elektroforez en moleküler biyoloji laboratuvarları için vazgeçilmez bir yöntemdir. Piyasada bulunan minigels rahatlık yüksek düzeyde sağlamak, ama pahalıya mal olabilir. Burada ticari minigels popüler bir marka minigel kasetleri yeniden nasıl kullanılacağını göstermektedir. Bu yöntem jellerin hazır bir kaynağı sahip kolaylık korur, ancak ticari minigels maliyetinin bir kısmını. Bu prosedür önemli adımlarından tamamen sızmasını önlemek için unpolymerized akrilamid eklemeden ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar AH Yaşam ödülü için UF Bilim Howard Hughes Tıp Enstitüsü teşekkür
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Invitrogen Nupage Novex Minigel Cassette (1.0 mm) | Invitrogen | NC2010 | Available in 2, 5, 10, 12, 15 and 2D wells |
| Plastic Epoxy | Loctite | 108771 | |
| Electrical Tape | Scotch | ||
| 125 mL side arm flask | Pyrex | 5360 | |
| 4X Tris-Base resolving gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 8.7 | ||
| acrylamide | Fisher Scientific | 01065-500 | |
| Bis-acrylamide | MP Biomedicals, Inc. | 800173 | |
| 30.8% acrylamide solution | 30:0.8 acrylamide: bis-acrylamide in IRG-H2O | ||
| 10% APS | Fisher Scientific | BP179-25 | 0.1 g ammonium persulfate in 1 ml IRG-H2O, prepared immediately before use |
| TEMED | Arcos Organics | 138450500 | |
| 1-butanol saturated with 1X resolving gel buffer | 5:2 1-butanol to 1X resolving gel buffer | ||
| 4X Tris-Base stacking gel buffer | 1.5 M Tris-base pH 6.8 | ||
| Gel comb | Invitrogen | NC3015 | 15 well, 1.0 mm thickness |
| Impulse Sealer | TEW Electric Heating Equipment | ||
| Heat Sealable Pouch | Kapak/Scotchpak | 1 pint size (6.5″ x 8″) | |
| Gel storage buffer | 1X stacking gel buffer with 0.1% sodium azide | ||
| Novex SDS Tris-Glycine sample buffer (2X) | Invitrogen | LC2676 | |
| DTT | FisherBiotech | BP172-5 | |
| 10X Tris-Gylcine Running buffer | Invitrogen | LC2675 | 1L of 10X stock: 29.0 g Tris-Base, 144.0 g Glycine, 10.0 g SDS |
| XCell SureLock Mini-Cell | Invitrogen | EI0001 | |
| Gel Knife | Invitrogen | EI9010 | |
| SimplyBlue Safe Stain | Invitrogen | LC6065 |
References
- Laemmli, U. K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature. 227, 680-685 (1970).
- Raymond, S., Weintraub, L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis. Science. 130, 711-711 (1959).
- Schägger, H., von Jagow, G. Tricine-sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1 to 100 kDa. Anal. Biochem. 166, 368-379 (1987).
- Shapiro, A. L., Viñuela, E., Maizel, J. V. Molecular weight estimation of polypeptide chains by electrophoresis in SDS-polyacrylamide gels. Biochem. Biophys. Res. Commun. 28, 815-820 (1967).
