رني ضربة قاضية بوساطة الجينات و<em> في الجسم الحي</em> فحص إدرار البول في الإناث البالغات<em> الزاعجة المصرية</em> البعوض
Summary
في هذا البروتوكول ما جمعنا رني بوساطة إسكات الجينات مع<em> في الجسم الحي</em> فحص إدرار البول لدراسة آثار ضربة قاضية للجينات من لديه مصلحة في إفراز السائل البعوض.
Abstract
هذا الفيديو يشرح بروتوكول تقنية فعالة لضربة قاضية جين معين في حشرة وإجراء الاختبار الأحيائي رواية لقياس معدل الإفراز. ويمكن استخدام هذه الطريقة للحصول على فهم أفضل لعملية إدرار البول في الحشرات ويكون مفيدا بشكل خاص في دراسة إدرار البول في الدم والتغذية المفصليات التي تكون قادرة على حمل كميات كبيرة من السوائل في وجبة دم واحدة.
وقد تم تطوير هذا الجين رني ضربة قاضية بوساطة مقترنة في فحص إدرار البول المجراة من قبل مختبر هانسن إلى دراسة آثار رني بوساطة ضربة قاضية للجينات aquaporin على إدرار البول الزاعجة البعوض بعوض 1.
البروتوكول هو الإعداد في جزأين: أول مظاهرة يوضح كيفية بناء حقن البعوض جهاز بسيط، وكيفية تحضير وحقن الرنا المزدوج الجديلة في الصدر من البعوض لضربة قاضية الجينات [رني بوساطة. المظاهرة الثانية يوضح كيفية تحديدمعدلات إفراز في البعوض باستخدام الأحيائي في الجسم الحي.
Protocol
Discussion
وقد تم تطوير بروتوكول رني المستخدمة في المختبر من Raikhel الكسندر في جامعة ريفرسايد في كاليفورنيا 6،7 و هو مماثل لبروتوكول نشرته جارفر وDimopoulos 4. ويمكن استخدام المنهج التجريبي هو مبين في هذا البروتوكول الفيديو لدراسة الجينات المسؤولة عن إدرار البول حشرة في ال?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
المؤلفان بالشكر فيكتوريا كاربنتر للتعليق لها حاسم من هذا البروتوكول.
Materials
| Name of reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| MEGAscript T7 High Yield Kit | Ambion, Inc. | AM1334 | |
| PBS buffer | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Plastic tubing | Local vendor | PVC | |
| 1 ml plastic pipette tip | VWR | 83007-376 | Blue tip |
| 1 ml syringe | Becton, Dickinson and Company | 309602 | |
| Scissors | Local vendor | ||
| Metal needle | Carolina Biologicals | 654307 | Size 5 |
| Fly pad | Genesee Scientific | 789060 | |
| Battery-powered aspirator w/ collection vial | UPMA Labs | IPMM 2000 | |
| Fine tip forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
| Glass capillary needles | World Precision Instruments | 1B200-6 | |
| Stereo dissection microscope | Leica Microsystems | S6D | |
| Analytical precision balance | Mettler Toledo | AB54S | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | 84097 | |
| One pint waxed lined cardboard cups | Local vendor | Manufactured soup cups | |
| Mesh net | Local vendor | plastic fly gauze |
References
- Drake, L. L., et al. The Aquaporin gene family of the yellow fever mosquito, Aedes aegypti. PloS one. 5, e15578 (2010).
- Shepard, A. R., Jacobson, N., Clark, A. F. Importance of quantitative PCR primer location for short interfering RNA efficacy determination. Analytical biochemistry. 344, 287-288 (2005).
- Altschul, S. F., et al. Gapped BLAST and PSI-BLAST: a new generation of protein database search programs. Nucleic acids research. 25, 3389-3402 (1997).
- Garver, L., Dimopoulos, G. Protocol for RNAi Assays in Adult Mosquitoes (A. gambiae). J. Vis. Exp. (5), e230 (2007).
- Clements, A. N. Volume 1 Development, Nutrition, and Reproduction. The Biology of Mosquitoes. 2, (1992).
- Hansen, I. A., Attardo, G. M., Park, J. H., Peng, Q., Raikhel, A. S. Target of rapamycin-mediated amino acid signaling in mosquito anautogeny. Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 101, 10626-10631 (2004).
- Hansen, I. A., Attardo, G. M., Roy, S. G., Raikhel, A. S. Target of rapamycin-dependent activation of S6 kinase is a central step in the transduction of nutritional signals during egg development in a mosquito. The Journal of biological chemistry. 280, 20565-20572 (2005).
- Pannabecker, T. Physiology of the Malpighian Tubule. Annual review of entomology. 40, 493-510 (1995).
- Dow, J. New insights into Malpighian tubule function from functional genomics. Comp Biochem Phys A. 150, S135 (2008).
- Dow, J. A. T. Insights into the Malpighian tubule from functional genomics. Journal of Experimental Biology. 212, 435-445 (2009).
- Lawson, D., et al. VectorBase: a data resource for invertebrate vector genomics. Nucleic acids research. 37, 583-587 (2009).
- Beyenbach, K. W. Transport mechanisms of diuresis in Malpighian tubules of insects. J. Exp. Biol. 206 (Pt 21), 3845-3856 (2003).
- Coast, G. M. Continuous recording of excretory water loss from Musca domestica using a flow-through humidity meter: hormonal control of diuresis. Journal of insect physiology. 50, 455-468 (2004).
- Kersch, C. N., Pietrantonio, P. V. Mosquito Aedes aegypti (L.) leucokinin receptor is critical for in vivo fluid excretion post blood feeding. FEBS letters. 585, 3507-3512 (2011).
- Hays, A. R., Raikhel, A. S. A novel protein produced by the vitellogenic fat body and accumulated in mosquito oocytes. Development Genes and Evolution. 199, 114-121 (1990).
