RNAi-vermittelte Gen-Knockdown und<em> In Vivo</em> Diurese Assay in Adult Female<em> Aedes aegypti</em> Moskitos
Summary
In diesem Protokoll kombinieren wir RNAi-vermittelte Gen-Silencing mit ein<em> In-vivo-</em> Diurese Assay, um die Auswirkungen Knockdown von Genen von Interesse Studie wurde auf Moskito-Flüssigkeit ausgeschieden.
Abstract
Dieses Video demonstriert Protokoll eine effektive Technik, um ein bestimmtes Gen in einer Insekten und die Durchführung einer neuartigen Bioassay zur Ausscheidung zu messen. Diese Methode kann verwendet werden, um ein besseres Verständnis des Prozesses der Diurese bei Insekten erhalten werden und ist besonders nützlich bei der Untersuchung der Diurese in blutsaugende Arthropoden, die aufnehmen können große Mengen an Flüssigkeit in einem einzigen Blutmahlzeit sind.
Das RNAi-vermittelten Gen Knockdown mit einem In-vivo-Assay kombiniert Diurese wurde von der Hansen-Labor entwickelt, um die Effekte der RNAi-vermittelte Reduktion von Aquaporin-Gene auf Aedes aegypti Moskito Diurese 1 studierst.
Das Protokoll ist Setup in zwei Teile: der erste Beispiel demonstriert, wie man ein einfaches Moskitonetz Injektionsgerät konstruieren und zur Vorbereitung und injizieren dsRNA in den Brustkorb von Mücken für RNAi-vermittelte Gen-Knockdown. Das zweite Beispiel demonstriert, wie Sie feststellen,Ausscheidung in Moskitos mit einem In-vivo-Bioassay.
Protocol
Discussion
Die RNAi-Protokoll verwendet wurde im Labor von Alexander Raikhel wurde an der University of California Riverside 6,7 entwickelt und ist vergleichbar mit einem Protokoll, das von Garver und Dimopoulos 4 veröffentlicht. Der experimentelle Ansatz in diesem Video-Protokoll gezeigt werden verwendet, um Gene in Insektenzellen Diurese in einem in-vivo-Umgebung verwickelt zu werden. Die Ausscheidungsorgane der Insekten, die Malpighischen Gefäßen, haben das Interesse von Generationen v…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Die Autoren danken Victoria Carpenter für ihre kritischen Kommentare dieses Protokolls.
Materials
| Name of reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| MEGAscript T7 High Yield Kit | Ambion, Inc. | AM1334 | |
| PBS buffer | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Plastic tubing | Local vendor | PVC | |
| 1 ml plastic pipette tip | VWR | 83007-376 | Blue tip |
| 1 ml syringe | Becton, Dickinson and Company | 309602 | |
| Scissors | Local vendor | ||
| Metal needle | Carolina Biologicals | 654307 | Size 5 |
| Fly pad | Genesee Scientific | 789060 | |
| Battery-powered aspirator w/ collection vial | UPMA Labs | IPMM 2000 | |
| Fine tip forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
| Glass capillary needles | World Precision Instruments | 1B200-6 | |
| Stereo dissection microscope | Leica Microsystems | S6D | |
| Analytical precision balance | Mettler Toledo | AB54S | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | 84097 | |
| One pint waxed lined cardboard cups | Local vendor | Manufactured soup cups | |
| Mesh net | Local vendor | plastic fly gauze |
References
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