आरएनएआई की मध्यस्थता जीन मारकर गिरा दिया और<em> Vivo में</emवयस्क महिला में diuresis परख<em> एडीज aegypti</em> मच्छरों
Summary
इस प्रोटोकॉल में हम एक साथ आरएनएआई की मध्यस्थता जीन मुंह गठबंधन<em> Vivo में</em> मूत्राधिक्य परख के लिए ब्याज की जीन के प्रभाव का अध्ययन पछाड़ना मच्छर तरल पदार्थ उत्सर्जन पर है.
Abstract
यह वीडियो प्रोटोकॉल के लिए एक कीट में एक विशेष जीन को पछाड़ना और उत्सर्जन की दर को मापने के लिए एक उपन्यास bioassay आचरण के लिए एक प्रभावी तकनीक को दर्शाता है. इस विधि के लिए कीड़ों में एक मूत्राधिक्य की प्रक्रिया की एक बेहतर समझ प्राप्त करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है और रक्त खिला आर्थ्रोपोडा है कि एक एक रक्त भोजन में तरल पदार्थ की भारी मात्रा में लेने में सक्षम हैं में मूत्राधिक्य के अध्ययन में विशेष रूप से उपयोगी है.
यह आरएनएआई की मध्यस्थता जीन पछाड़ना vivo मूत्राधिक्य परख में एक के साथ संयुक्त Hansen के प्रयोगशाला द्वारा विकसित किया गया था एडीज aegypti मच्छर 1 मूत्राधिक्य पर aquaporin जीन पछाड़ना आरएनएआई की मध्यस्थता के प्रभाव का अध्ययन.
प्रोटोकॉल दो भागों में सेटअप है: पहला प्रदर्शन दिखाता है कि कैसे एक साधारण मच्छर इंजेक्शन युक्ति का निर्माण करने के लिए और कैसे तैयार करने और आरएनएआई की मध्यस्थता जीन पछाड़ना के लिए dsRNA इंजेक्षन मच्छरों की छाती में है. दूसरी प्रदर्शन दिखाता है कि कैसे निर्धारित करने के लिएvivo bioassay में एक का उपयोग मच्छरों में उत्सर्जन की दर.
Protocol
Discussion
आरएनएआई इस्तेमाल किया प्रोटोकॉल के कैलिफोर्निया रिवरसाइड 6,7 विश्वविद्यालय में सिकंदर Raikhel की प्रयोगशाला में विकसित किया गया है और गार्वर और 4 Dimopoulos के द्वारा प्रकाशित प्रोटोकॉल के समान है. प्रयो…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
लेखक इस प्रोटोकॉल के उसके महत्वपूर्ण टिप्पणियों के लिए विक्टोरिया बढ़ई धन्यवाद.
Materials
| Name of reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| MEGAscript T7 High Yield Kit | Ambion, Inc. | AM1334 | |
| PBS buffer | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Plastic tubing | Local vendor | PVC | |
| 1 ml plastic pipette tip | VWR | 83007-376 | Blue tip |
| 1 ml syringe | Becton, Dickinson and Company | 309602 | |
| Scissors | Local vendor | ||
| Metal needle | Carolina Biologicals | 654307 | Size 5 |
| Fly pad | Genesee Scientific | 789060 | |
| Battery-powered aspirator w/ collection vial | UPMA Labs | IPMM 2000 | |
| Fine tip forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
| Glass capillary needles | World Precision Instruments | 1B200-6 | |
| Stereo dissection microscope | Leica Microsystems | S6D | |
| Analytical precision balance | Mettler Toledo | AB54S | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | 84097 | |
| One pint waxed lined cardboard cups | Local vendor | Manufactured soup cups | |
| Mesh net | Local vendor | plastic fly gauze |
References
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