RNAi-mediato Knockdown Gene e<em> In Vivo</em> Saggio La diuresi in femmina adulta<em> Aedes aegypti</em> Le zanzare
Summary
In questo protocollo si combinano RNAi-mediato silenziamento genico con un<em> In vivo</em> Test diuresi per studiare il colpo degli effetti dei geni di interesse ha sulla escrezione di liquidi zanzara.
Abstract
Questo protocollo video mostra una tecnica efficace per abbattere un particolare gene in un insetto e condurre un biotest romanzo per misurare il tasso di escrezione. Questo metodo può essere utilizzato per ottenere una migliore comprensione del processo di diuresi in insetti ed è particolarmente utile nello studio della diuresi nel sangue alimentazione artropodi in grado di raccogliere grandi quantità di liquido in un pasto di sangue singolo.
Questo RNAi-mediato knockdown gene combinato con un test in vivo diuresi è stato sviluppato dal laboratorio di Hansen per studiare gli effetti di RNAi-mediato knockdown di geni acquaporina sulla diuresi zanzara Aedes aegypti 1.
Il protocollo è configurato in due parti: la prima dimostrazione illustra come costruire un semplice dispositivo di iniezione zanzare e su come preparare ed iniettare dsRNA nel torace di zanzare per RNAi-mediato knockdown gene. La seconda dimostrazione illustra come determinaretassi di escrezione nelle zanzare utilizzando un saggio biologico in vivo.
Protocol
Discussion
Il protocollo utilizzato RNAi è stato sviluppato nel laboratorio di Alexander Raikhel presso la University of California Riverside 6,7 ed è simile a un protocollo pubblicato da Garver e Dimopoulos 4. L'approccio sperimentale mostrato in questo protocollo video possono essere utilizzati per studiare i geni coinvolti nella diuresi insetto in un ambiente in vivo. Gli organi escretori di insetti, i tubuli malpighiani, hanno attirato l'interesse di generazioni di ricercatori come un s…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Gli autori ringraziano Victoria Carpenter per i suoi commenti critici di questo protocollo.
Materials
| Name of reagent or equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| MEGAscript T7 High Yield Kit | Ambion, Inc. | AM1334 | |
| PBS buffer | Sigma-Aldrich | P4417 | |
| Plastic tubing | Local vendor | PVC | |
| 1 ml plastic pipette tip | VWR | 83007-376 | Blue tip |
| 1 ml syringe | Becton, Dickinson and Company | 309602 | |
| Scissors | Local vendor | ||
| Metal needle | Carolina Biologicals | 654307 | Size 5 |
| Fly pad | Genesee Scientific | 789060 | |
| Battery-powered aspirator w/ collection vial | UPMA Labs | IPMM 2000 | |
| Fine tip forceps | World Precision Instruments | 14095 | |
| Glass capillary needles | World Precision Instruments | 1B200-6 | |
| Stereo dissection microscope | Leica Microsystems | S6D | |
| Analytical precision balance | Mettler Toledo | AB54S | |
| Sucrose | Sigma-Aldrich | 84097 | |
| One pint waxed lined cardboard cups | Local vendor | Manufactured soup cups | |
| Mesh net | Local vendor | plastic fly gauze |
References
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