Immunzytochemische Identifizierung der peripheren sensorischen Nervenfasern Subtypen (und Detektion von Protein-Expression darin) sind der Schlüssel zum Verständnis der molekularen Mechanismen, die periphere Empfindung. Hier beschreiben wir Methoden für die Herstellung von peripheren / viszeralen Gewebeproben, wie Haut-und Gliederschmerzen Knochen, für spezifische Immunfärbung der peripheren sensorischen Nervenfasern.
Erkennung und primäre Verarbeitung von physikalischen, chemischen und thermischen Sinnesreize von peripheren sensorischen Nervenfasern ist der Schlüssel zur sinnlichen Wahrnehmung bei Tieren und Menschen. Diese peripheren sensorischen Nervenfasern ausdrücklichen eine Vielzahl von Rezeptoren und Ionenkanälen Proteine, die erkennen und initiieren spezifische Sinnesreize. Es gibt Methoden, um die elektrischen Eigenschaften der peripheren sensorischen Nervenfasern innervieren die Haut, die auch genutzt werden, um die funktionelle Expression von spezifischen Ionenkanal-Proteinen in diesen Fasern zu identifizieren können charakterisieren. Allerdings sind ähnliche elektrophysiologische Methoden nicht zur Verfügung (und sind auch schwierig zu entwickeln) für den Nachweis der funktionalen Expression von Rezeptoren und Ionenkanälen Proteine in peripheren sensorischen Nervenfasern innervieren anderen inneren Organen, einschließlich der anspruchsvollsten Geweben wie Knochen. Darüber hinaus können solche elektrophysiologischen Methoden nicht genutzt werden, um die Expression von nicht-erregbaren Protein bestimmens in peripheren sensorischen Nervenfasern. Daher bietet Immunfärbung der peripheren / viszeralen Gewebeproben für die sensorische Nerven Fivers den bestmöglichen Weg, um die Expression bestimmter Proteine von Interesse in dieser Nervenfasern ermitteln. Bisher haben die meisten der Proteinexpression Studien in sensorischen Neuronen genutzt Immunfärbung Verfahren in sensorischen Ganglien, wo die Informationen, um die Expression bestimmter Proteine in der Zelle Körper bestimmter Arten oder Untergruppen von sensorischen Neuronen begrenzt ist. Hier berichten wir über detaillierte Methoden / Protokolle für die Herstellung von peripheren / viszeralen Gewebeproben für Immunfärbung der peripheren sensorischen Nervenfasern. Wir haben uns speziell Detail Methoden zur Herstellung von Haut-oder plantar Stanzbiopsie und Knochen (Femur) Abschnitte von Mäusen für Immunfärbung der peripheren sensorischen Nervenfasern. Diese Methoden sind nicht nur ausschlaggebend für die qualitative Bestimmung von Protein-Expression in peripheren sensorischen Neuronen, sondern auch eine quantitative Nachweisverfahren fürBestimmung von Veränderungen in der Proteinexpression Ebenen in bestimmten Arten oder Untergruppen von sensorischen Fasern, sowie für die Bestimmung der morphologischen und / oder anatomische Veränderungen in der Anzahl und Dichte der sensorischen Fasern bei verschiedenen pathologischen Zuständen. Darüber hinaus sind diese Methoden nicht auf die Färbung von nur sensorischen Nervenfasern beschränkt, sondern kann auch zur Färbung alle Arten von Nervenfasern in der Haut, Knochen und anderen viszeralen Gewebe verwendet werden.
Hier haben wir die Methoden zur Vorbereitung der Haut von Mäusen und Knochengewebe Abschnitte für Immunfärbung und Erkennung von peripheren sensorischen Nervenfasern beschrieben. Die Abschnitte von plantar Stanzbiopsien produziert enthalten sowohl kahl und behaarte Haut, was bedeutet, das Protokoll über jeden Hauttyp verwendet werden kann. Diese Techniken können auch eingesetzt werden, um andere Zelltypen in diesen Geweben Flecken (z. B. Leukozyten, vaskulären Endothelzellen, glatte Muskelzellen ua) werden. Diese …
The authors have nothing to disclose.
Wir danken Dr. Yuriy M. Usachev für seine Hilfe in der ersten Standardisierung der konfokalen Mikroskopie / Bildgebung der Maus plantar Stanzbiopsie Immunfärbung und Dr. Donna L. Hammond für ihre weitere Unterstützung und konstruktive Kritik an dieser Arbeit. Diese Arbeit wurde durch Zuschüsse aus dem NINDS / NIH (NS069898), und eine Idee Development Grant Award von dem Department of Defense Prostate Cancer Research Program (DoD-PCRP-101096) zur DPM finanziert
Material Name | Type | Company | Catalogue No. | Comment |
3mm Harris Micro-Punch | Material | Ted Pella | 15094 | |
Perfusion pump | Material | VWR International | 23609-170 | |
Paraformaldehyde | Reagent | Fisher Scientific | T353 | |
Picric acid | Reagent | Sigma-Aldrich | 239801 | |
OCT Embedding compound | Reagent | Tissue-Tek | 4583 | |
Cyto-Freeze cryogenic aerosol spray | Material | Control Company | 3118 | |
Goat Serum | Reagent | Sigma-Aldrich | G9023 | |
Incubation tray and lid for Immunostaining (Large) | Material | RPI Corp. | 248270 (tray) 248270-A (lid) |
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ImmEdge hydrophobic barrier pen | Material | Vector Laboratories | H-4000 | |
Camel’s Hair Brushes (#1 thickness) | Material | Ted Pella | 11859 | |
Pro‐Long Gold Mounting medium | Reagent | Invitrogen | P36930 |