시간 경과 비디오 현미경을 이용한 세포의 무작위 마이 그 레이션의 정량 분석
Summary
이 방법은 실제 시간과 같은 속도, 변위와 속도 등 다양한 세포 이주 매개 변수의 양적 측정에 세포의 모니터링이 가능합니다. 전통적인 방법과는 달리,이 실시간 접근법 끝점 양적 마이 그 레이션 측정에 기초하지 않고 대신 그것은 모니터링하고 지속적으로 서로 다른 매개 변수를 계산할 수 있습니다.
Abstract
세포 이주는 배아 개발, 조직 복구, 면역 체계 기능, 그리고 종양 침공 1, 2를 위해 중요하다 역동적인 과정이다. 방향 마이 그 레이션하는 동안 세포는 세포외 chemotactic 신호에 대응하거나, 기본적인 운동성 기계에서 제공하는 본질적인 단서 3 응답으로 급속하게 이동합니다. 세포는 세포가 자신의 로컬 환경을 탐험 있도록 낮은 본질적인 방향성을 가지고하면 랜덤 마이 그 레이션이 발생합니다.
세포 이주는 초기 응답 세포에서 복잡한 과정이다 분극을 거쳐 및 마이 그 레이션 2의 방향으로 라고나을 확장합니다. 이러한 Boyden 챔버 마이 그 레이션 분석과 같은 마이 그 레이션을 측정하는 전통적인 방법은 끝점 결과로 마이 그 레이션을 측정하는 수 체외에서 chemotaxis를 측정하기위한 쉬운 방법입니다. 그러나,이 접근법은 역시 개별적인 마이 그 레이션 매개 변수의 측정을 허용하지 않으며 그것은 visua 수 있습니까세포가 마이 그 레이션하는 동안 겪습하는 형태학의 변경 lization.
저속 현미경 – 여기, 우리는 비디오를 사용하여 실시간으로 이주하는 세포를 관찰 할 수 있습니다 방법을 제시한다. 세포 이주와 침략이 암의 특징이기 때문에이 방법은 체외에서 암 세포 이주와 침략을 연구에 적용 될 것입니다. 혈소판의 무작위 마이 그 레이션은 혈소판 기능 4의 매개 변수 중 하나로서 간주되었으며, 따라서이 방법은 또한 혈소판 기능을 공부에 많은 도움이 될 수 있습니다. 이 분석은 신속하고 안정적인 재현성 적의를 가지고 있으며, 세포 숫자의 최적화가 필요하지 않습니다. 세포 생리학을위한 적합한 조건을 유지하기 위해서는 현미경이 CO 2 공급 및 온도 자동 온도 조절 장치를 갖추고 있습니다. 세포 운동은 정기적으로 현미경에 장착 카메라를 사용하여 사진을 찍고 의해 모니터링된다. 세포 이주는 측정 평균 속도로 계산할 수Slidebook 소프트웨어에 의해 계산됩니다 verage 변위.
Protocol
Discussion
실시간으로 무작위로 마이 그 레이션 분석은 속도와 변위와 같은 세포 이주 매개 변수 중 정확하고 민감한, 분석을 가능하게합니다. 이 방법은 포인트 측정 값을 끝낼 국한되지 않고, 따라서 그것은 더 많은 양적입니다. 이후 세포는 혈청과 정상 DMEM 배지에서 모니터링되며 그것은 혈청 무료 미디어 이상 인큐베이션의 해로운 효과를 감소시킵니다. 이것은 세포 마이 그 레이션이 서식하기 때문에?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
저자는 실험과 초기 도움 아만다 Struckhoff 감사드립니다. 이 작품은 NIH 5RO1CA115706에서 교부금에 의해 지원되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| DMEM | Thermo Scientific | SH30243.01 | |
| FBS | Gemini Bio- Products | 100-106 | |
| Opti-Mem | Invitrogen | 31985-070 | |
| Collagen | BD | 354231 | |
| Microscope with Live Cell chamber & Automated XY stage controller | Olympus | Olympus 1X81 | |
| Environmental control chamber | Neue | Neue Live Cell Chamber | Ours has a custom built rectangular glass plate top for appropriate optics through the top of the chamber. The rectangular shape accommodates multi-well plates used in many of our experiments. |
| Automated XY stage | Prior | Prior Proscan | This allows precise return to multiply selected XY positions during time lapse microscopy. |
| Camera | Hamamatsu EM camera C9100 | ||
| Software | Typically purchased through microscope vendor such as Olympus | Slide Book 5 |
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