Этот метод позволяет осуществлять мониторинг клеток в реальном времени и количественных измерений различных параметров миграции клеток, таких как скорость, перемещение и скорость. В отличие от традиционных методов, это реальный подход время не на основе конечных количественных измерений миграции, вместо этого она позволяет осуществлять мониторинг и расчет различных параметров непрерывно.
Сотовые миграция представляет собой динамический процесс, который имеет важное значение для эмбрионального развития, восстановления тканей, иммунной системы, а также опухолевой инвазии 1, 2. В направленной миграции клеток быстро двигаться в ответ на внеклеточный сигнал хемотаксиса, или в ответ на внутренние сигналы 3 предоставляемых базовых механизмов подвижности. Случайные миграция происходит, когда клетка обладает низкой внутренней направленности, что позволяет клеткам, чтобы исследовать их местным условиям.
Сотовые миграция представляет собой сложный процесс, в начальной клеточной реакции происходят поляризация и продолжается выступы в направлении миграции 2. Традиционные методы измерения миграции, таких как миграция анализа Бойден камеры простой способ измерения хемотаксис в пробирке, который позволяет измерить миграцию как результат конечной точки. Однако, этот подход позволяет ни измерения отдельных параметров миграции, а также не позволит видеотехникакристаллизации морфологические изменения, которые клетка претерпевает в процессе миграции.
Здесь мы представляем метод, который позволяет нам отслеживать миграцию клеток в реальном времени с помощью видео – микроскопия промежуток времени. Поскольку миграция клеток и вторжения являются признаками рака, этот метод будет применяться в изучении рака миграции клеток и вторжение в пробирке. Случайные миграции тромбоцитов была рассматриваться в качестве одного из параметров тромбоцитов 4 функция, следовательно, этот метод также может быть полезно в изучении функции тромбоцитов. Этот тест имеет то преимущество, что быстрые, надежные, воспроизводимые и не требует оптимизации числа клеток. В целях сохранения физиологически благоприятные условия для клетки, микроскоп снабжен CO 2 и температуры подачи термостата. Сотовые движение контролируется фотосъемки с помощью камеры устанавливается на микроскоп на регулярной основе. Сотовые миграция может быть вычислена путем измерения средней скорости иverage перемещения, который рассчитывается путем программного Slidebook.
В режиме реального времени случайного анализа миграции позволяет точно, чувствительный, анализ миграции клеток такие параметры, как скорость и перемещение. Этот метод не ограничивается до конца значение точки измерения, следовательно, количественные. Так, клетки контролируется в нор?…
The authors have nothing to disclose.
Авторы хотели бы поблагодарить Amanda Struckhoff для начальной помощь в проведении эксперимента. Эта работа была поддержана грантом от NIH 5RO1CA115706.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | Thermo Scientific | SH30243.01 | |
FBS | Gemini Bio- Products | 100-106 | |
Opti-Mem | Invitrogen | 31985-070 | |
Collagen | BD | 354231 | |
Microscope with Live Cell chamber & Automated XY stage controller | Olympus | Olympus 1X81 | |
Environmental control chamber | Neue | Neue Live Cell Chamber | Ours has a custom built rectangular glass plate top for appropriate optics through the top of the chamber. The rectangular shape accommodates multi-well plates used in many of our experiments. |
Automated XY stage | Prior | Prior Proscan | This allows precise return to multiply selected XY positions during time lapse microscopy. |
Camera | Hamamatsu EM camera C9100 | ||
Software | Typically purchased through microscope vendor such as Olympus | Slide Book 5 |