탯줄 혈액에서 세포 독성 T 림프구 확장이 대상 사이토 메갈로 바이러스, 엡스타인 - 바 바이러스, 그리고 아데노 바이러스
Summary
여기가 첫 번째 좋은 생산 관행 (GMP)을 준수하는 탯줄 혈액, 주로 나이브 T 세포의 소스에서 바이러스 특정 세포 독성 T 림프구 (CTL)를 생산 방법을 설명합니다.
Abstract
줄기 세포 이식 후 바이러스 감염, 특히 탯줄 혈액 후, 죽음의 가장 일반적인 원인 중 일부입니다 (CB) 이식 (CBT) 어디 CB가 감염에서 수신자를 보호 할 수 있습니다 바이러스 경험이 풍부한 T 세포 1 감지 숫자가 포함되어 있지 않습니다. – 우리와 다른 사람들이 바이러스에 특정한 CTL seropositive 기증자에서 생성하고받는 사람에게 주입하는 것으로 나타났습니다 4 안전하고 보호합니다. 5-8는하지만, 최근까지 바이러스 특정 T 세포가로 인해 가능성, 탯줄 혈액에서 생성 할 수 없습니다 바이러스 특정 메모리 T 세포의 부재.
더 나은 나이브 T 세포의 생체 프라이밍 조건에서을 모방하기 위해, 우리는 따라서 T 세포 특이성 운전, CB-파생 수지상 세포 (DC)은 immunodominant CMV의 항원 pp65을 포함하는 adenoviral 벡터 (Ad5f35pp65)과 transduced 사용 방법을 설립 시작시 CMV와 아데노 바이러스 9.을 향해, 우리는 이러한 mA를 사용tured 코디네이터뿐만 아니라 모두를 표현 IL-7, IL-12와 IL-15. 두 번째 우리가 EBV-변환 B 세포를 사용 자극, 또는 EBV-LCL, 10 크린 시토 킨의 존재에 CB-파생 T 세포 잠재 및 lytic EBV의 항원. Ad5f35pp65 – transduced EBV-LCL은 두 번째 자극의 IL-15의 존재에 T 세포를 자극하는 데 사용됩니다. 이후 stimulations는 EBV-LCL 및 IL-2 Ad5f35pp65 – transduced을 사용합니다.
50×10 6 CB mononuclear 세포부터 우리는 antigenic의 자극에 대한 응답으로 항원 펄스 목표 및 출시 크린 시토 킨을 lyse 150 X 10 6 바이러스 특정 T 세포의 이상을 생성 할 수 있습니다. 11이 세포를 사용하여 GMP 호환 방식으로 제조 된 단 20 % fractionated 탯줄 혈액 단위의 분율하며 임상 사용하기 위해 번역되었습니다.
Protocol
Discussion
CBT 이후 바이러스 감염을 제어하기위한 현재의 전략은 효과적 일 수 있지만, 그들은 상당한 toxicities와 관련된, 비싸고, 나중에 감염에 대한 장기적인 보호를 부여하지 않습니다. 사실, 일부 바이러스 약물의 사용은 다른 보호 될 바이러스 특정 T 세포의 확장을 제한 할 수 있습니다. 14 또 다른 옵션은 기증자 파생 바이러스 특정 T 세포의 주입이다. 우리와 다른 사람들이 이러한 T 세포?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
이 작품은 단 L. 던컨 공동 연구 기금 (CMB와 EJS), 국립 심장, 폐, 및 혈액 연구소 (US4HL081007), 백혈병 및 림프종 학회 임상 연구 학술 상 (CMB) 및 국립 암 연구소에 의해 지원되었다 (RO1 CA06150816, EJS).
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 21870-076 |
| DC media | CellGenix | 20801-0500 |
| EHAA (Click’s Medium) | Irvine Scientific | 9195 |
| Human Serum | Gemini Bio Products | 100-110 |
| Gas Permeable Cultureware18 | Wilson-Wolf | 80040S |
| IL-2 | Chiron (TCH Pharmacy) | |
| IL-12 | NCI/CTEP | |
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 |
| IL-7 | R&D | AFL207 |
| IL-1beta | R&D | AFL201 |
| IL-6 | CellGenix | 1004-050 |
| GM-CSF | TCH Pharmacy | |
| IL-4 | R&D | AFL204 |
| TNF-alpha | R&D | AFL210 |
| Ad5f35pp65 | BCM CAGT Vector Production Facility | |
| Plasma transfer set with female luer adapter | Charter Medical | 89-550-66j |
| Lymphoprep | Nycomed | 1114550 |
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