L'expansion des lymphocytes T cytotoxiques à partir de sang de cordon ombilical qui cytomégalovirus cible, le virus Epstein-Barr Virus et Adénovirus
Summary
Nous décrivons ici la première bonne pratique de fabrication (BPF) conforme à la méthode de production spécifiques du virus de lymphocytes T cytotoxiques (CTL) à partir de sang de cordon ombilical, source de cellules T naïves principalement.
Abstract
Les infections virales après transplantation de cellules souches sont parmi les causes les plus fréquentes de décès, en particulier après le sang du cordon (CB) transplantation (TCC) où le CB ne contient pas un nombre appréciable de cellules T du virus expérimentés qui peuvent protéger le destinataire de l'infection 1. – 4 Nous et d'autres ont montré que le virus de CTL spécifique généré à partir de donneurs séropositifs et infusé au bénéficiaire sont en sécurité et de protection. 8.5 Cependant, jusqu'à récemment, le virus de cellules T spécifiques ne pouvaient pas être générée à partir de sang de cordon, probablement en raison de la absence de virus-cellules T spécifiques de la mémoire.
Dans un effort pour mieux imiter les conditions d'amorçage in vivo des cellules T naïves, nous avons établi une méthode qui a utilisé des cellules dendritiques dérivées de CB (DC) transduites avec un vecteur adénoviral (Ad5f35pp65) contenant l'antigène pp65 CMV immunodominant, par conséquent, de conduire la spécificité des lymphocytes T vers le CMV et l'adénovirus. 9 Au début, nous utilisons ces machinesPED structurés, ainsi que CB dérivées des cellules T en présence des cytokines IL-7, IL-12 et IL-15. Au 10 secondes, nous avons utilisé la stimulation transformées par EBV des cellules B, ou EBV-LCL, qui expriment à la fois latente et lytiques antigènes d'EBV. Ad5f35pp65-transduites EBV-LCL sont utilisés pour stimuler les cellules T en présence d'IL-15 à la seconde stimulation. Stimulations ultérieures utilisent Ad5f35pp65 transduites par EBV-LCL et de l'IL-2.
De 6 CB 50×10 cellules mononucléaires nous sommes en mesure de générer plus de 150 x 10 6 virus de cellules T spécifiques de l'antigène qui lysent des cibles pulsées et des cytokines libération en réponse à une stimulation antigénique. 11 Ces cellules ont été fabriqués d'une manière conforme aux BPF en utilisant seulement la fraction 20% d'une unité de fractionnement de sang de cordon et qui ont été convertis pour un usage clinique.
Protocol
Discussion
Les stratégies actuelles visant à lutter contre les infections virales après CBT peuvent être efficaces, mais ils sont associés à des toxicités importantes, sont coûteux, et ne confèrent pas une protection à long terme contre l'infection plus tard. En fait, l'utilisation de certains médicaments antiviraux peuvent limiter l'expansion des cellules T spécifiques du virus qui seraient autrement protection. 14 Une autre option est l'infusion de cellules virales spécifiques des ba…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par un Dan L. Duncan subvention de recherche concertée (CMB et EJS), le National Heart, Lung, and Blood Institute (US4HL081007), une Société de leucémie et lymphome prix de recherche clinique Scholar (CMB) et le National Cancer Institute (RO1 CA06150816; EJS).
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 21870-076 |
| DC media | CellGenix | 20801-0500 |
| EHAA (Click’s Medium) | Irvine Scientific | 9195 |
| Human Serum | Gemini Bio Products | 100-110 |
| Gas Permeable Cultureware18 | Wilson-Wolf | 80040S |
| IL-2 | Chiron (TCH Pharmacy) | |
| IL-12 | NCI/CTEP | |
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 |
| IL-7 | R&D | AFL207 |
| IL-1beta | R&D | AFL201 |
| IL-6 | CellGenix | 1004-050 |
| GM-CSF | TCH Pharmacy | |
| IL-4 | R&D | AFL204 |
| TNF-alpha | R&D | AFL210 |
| Ad5f35pp65 | BCM CAGT Vector Production Facility | |
| Plasma transfer set with female luer adapter | Charter Medical | 89-550-66j |
| Lymphoprep | Nycomed | 1114550 |
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