הרחבת לימפוציטים מסוג T ציטוטוקסיים מדם טבורים שציטומגלווירוס יעד, וירוס אפשטיין באר, וadenovirus
Summary
כאן אנו מתארים אימון הראשון הטוב הייצור (GMP)-תואמת שיטה של ייצור תאי T ציטוטוקסיים וירוס ספציפיים (CTL) מדם טבורים, מקור לתאי T בעיקר נאיביים.
Abstract
הידבקות בוירוסים לאחר השתלת תאי גזע הן בין הגורמים השכיחים ביותר למוות, במיוחד לאחר דם טבורים (CB) השתלה (CBT) בי CB אינו מכיל מספרים ניכרים של תאי וירוס מנוסים T שיכול להגן על הנמען מהזיהום 1. – 4 אנחנו ואחרים הראינו שנוצרו וירוס הספציפי CTL מתורמים נושאים את ה HIV והחדירו לנמען הם בטוחים ומגוננים. 5-8 עם זאת, עד לאחרונה, תאי T ספציפיים לוירוס לא יכולים להיות שנוצרו מדם הטבורי, כנראה עקב היעדר תאי T זיכרון ספציפיים לוירוס.
במאמץ טוב יותר כדי לחקות את התנאים בייזום vivo של תאי T נאיביים, הקים שיטה שהשתמשה בתאים דנדריטיים CB-derived (DC) transduced עם וקטור adenoviral (Ad5f35pp65) המכיל את האנטיגן pp65 immunodominant CMV, ולכן נוהג סגולי תא T לקראת CMV ואדנווירוס. 9 בייזום, אנו משתמשים ma אלהDCS tured כמו גם תאי T CB-derived בנוכחותם של ציטוקינים IL-7, IL-12, ו IL-15. 10 בגירוי השני שהשתמשנו EBV הפך-תאי B, או EBV-LCL, שמביעים שניהם אנטיגנים EBV ממוסס סמוי ו. Ad5f35pp65-transduced EBV-LCL משמש כדי לגרות את תאי T בנוכחות של IL-15 בגירוי השני. גירויים שלאחר מכן להשתמש Ad5f35pp65-transduced EBV-LCL וIL-2.
מ50×10 6 תאי mononuclear CB אנו מסוגלים לייצר למעלה מ 150 10 6 תאי T x וירוס ספציפיים שlyse מטרות אנטיגן פעמו וציטוקינים שחרור בתגובה לגירוי antigenic. 11 תאים אלו יוצרו באופן GMP תואם רק באמצעות חלק 20% מיחידת דם טבורים מופרדת ותורגם לשימוש קליני.
Protocol
Discussion
אסטרטגיות נוכחיות נועדו לשלוט זיהומים נגיפיים לאחר CBT יכולות להיות יעילות, אבל הם קשורים עם רעילויות משמעותיות, הם יקרים, ואינם מעניקות הגנה לטווח ארוכה מפני זיהום מאוחר יותר. למעשה, השימוש בכמה תרופות אנטי עלול להגביל את ההתפשטות של תאים ספציפיים לוירוס T שאחרת ה?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עבודה זו נתמכה על ידי דן דאנקן שיתופי מענק מחקר (CMB וEJS), לב, ריאה הלאומית, ודם מכון (US4HL081007), לוקמיה ולימפומה פרס אגודת מחקר הקליני Scholar (CMB), והמכון הלאומי לסרטן (RO1 CA06150816; EJS).
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 21870-076 |
| DC media | CellGenix | 20801-0500 |
| EHAA (Click’s Medium) | Irvine Scientific | 9195 |
| Human Serum | Gemini Bio Products | 100-110 |
| Gas Permeable Cultureware18 | Wilson-Wolf | 80040S |
| IL-2 | Chiron (TCH Pharmacy) | |
| IL-12 | NCI/CTEP | |
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 |
| IL-7 | R&D | AFL207 |
| IL-1beta | R&D | AFL201 |
| IL-6 | CellGenix | 1004-050 |
| GM-CSF | TCH Pharmacy | |
| IL-4 | R&D | AFL204 |
| TNF-alpha | R&D | AFL210 |
| Ad5f35pp65 | BCM CAGT Vector Production Facility | |
| Plasma transfer set with female luer adapter | Charter Medical | 89-550-66j |
| Lymphoprep | Nycomed | 1114550 |
References
- Kennedy-Nasser, A. A. Comparable outcome of alternative donor and matched sibling donor hematopoietic stem cell transplant for children with acute lymphoblastic leukemia in first or second remission using alemtuzumab in a myeloablative conditioning regimen. Biol. Blood Marrow Transplant. 14, 1245-1245 (2008).
- Hanley, P. J. Improving clinical outcomes using adoptively transferred immune cells from umbilical cord blood. Cytotherapy. 12, 713 (2010).
- Szabolcs, P., Cairo, M. S. Unrelated umbilical cord blood transplantation and immune reconstitution. Semin. Hematol. 47, 22 (2010).
- Canto, E., Rodriguez-Sanchez, J. L., Vidal, S. Distinctive response of naive lymphocytes from cord blood to primary activation via TCR. J. Leukoc. Biol. 74, 998-998 (2003).
- Leen, A. M. Monoculture-derived T lymphocytes specific for multiple viruses expand and produce clinically relevant effects in immunocompromised individuals. Nat. Med. 12, 1160-1160 (2006).
- Riddell, S. R. Restoration of viral immunity in immunodeficient humans by the adoptive transfer of T cell clones. Science. 257, 238 (1992).
- O’Reilly, R. J. Adoptive transfer of antigen-specific T-cells of donor type for immunotherapy of viral infections following allogeneic hematopoietic cell transplants. Immunol. Res. 38, 237-237 (2007).
- Peggs, K. S. Adoptive cellular therapy for early cytomegalovirus infection after allogeneic stem-cell transplantation with virus-specific T-cell lines. Lancet. 362, 1375-1375 (2003).
- Sili, U. Large-scale expansion of dendritic cell-primed polyclonal human cytotoxic T-lymphocyte lines using lymphoblastoid cell lines for adoptive immunotherapy. J. Immunother. 26, 241 (2003).
- Bollard, C. M. Good manufacturing practice-grade cytotoxic T lymphocytes specific for latent membrane proteins (LMP)-1 and LMP2 for patients with Epstein-Barr virus-associated lymphoma. Cytotherapy. 13, 518 (2011).
- Hanley, P. J. Functionally active virus-specific T cells that target CMV, adenovirus, and EBV can be expanded from naive T-cell populations in cord blood and will target a range of viral epitopes. Blood. 114, 1958 (1958).
- Hanley, P. J. Expansion of T cells targeting multiple antigens of cytomegalovirus, Epstein-Barr virus and adenovirus to provide broad antiviral specificity after stem cell transplantation. Cytotherapy. , (2011).
- Gerdemann, U. Generation of Multivirus-specific T Cells to Prevent/treat Viral Infections after Allogeneic Hematopoietic Stem Cell Transplant. J. Vis. Exp. (51), e2736 (2011).
- Mori, T., Kato, J. Cytomegalovirus infection/disease after hematopoietic stem cell transplantation. Int. J. Hematol. 91, 588 (2010).
- Einsele, H. Infusion of cytomegalovirus (CMV)-specific T cells for the treatment of CMV infection not responding to antiviral chemotherapy. Blood. 99, 3916 (2002).
- Bao, L. Expansion of cytomegalovirus pp65 and IE-1 specific cytotoxic T lymphocytes for cytomegalovirus-specific immunotherapy following allogeneic stem cell transplantation. Biol. Blood Marrow Transplant. 14, 1156 (2008).
- Shpall, E. J., Bollard, C. M., Brunstein, C. Novel cord blood transplant therapies. Biol. Blood Marrow Transplant. 17, S39-S45 (2011).
- Vera, J. F. Accelerated production of antigen-specific T cells for preclinical and clinical applications using gas-permeable rapid expansion cultureware (G-Rex. J. Immunother. 33, 305 (2010).
