Expandindo linfócitos T citotóxicos do sangue do cordão umbilical que citomegalovírus Target, vírus de Epstein-Barr, e Adenovirus
Summary
Aqui descrevemos a prática de fabricação primeiro (BPF) compatível com método de produção de vírus específicos linfócitos T citotóxicos (CTL) de sangue de cordão umbilical, fonte de células T predominantemente ingênua.
Abstract
Infecções por vírus após o transplante de células-tronco estão entre as causas mais comuns de morte, especialmente depois do sangue de cordão umbilical (CB) transplante (CBT), onde o BC não contém números apreciáveis de células T-vírus experientes que podem proteger o destinatário da infecção 1. – 4 Nós e outros autores mostraram que o vírus-specific CTL gerados a partir de dadores seropositivos e injectada para o receptor são seguras e de protecção. 5-8 No entanto, até há pouco tempo, as células T específicas para o vírus não pode ser gerado a partir de sangue do cordão umbilical, provavelmente devido ao ausência de vírus específicos de células T de memória.
Num esforço para melhor imitar a condições de estímulo in vivo de células T naive, foi estabelecido um método que utilizou células CB-derivadas dendríticas (DC) transduzida com um vector adenoviral (Ad5f35pp65) contendo o antigénio imunodominante CMV pp65, portanto dirigir a especificidade de células T para CMV e adenovírus. 9 No início, nós usamos estes maDCs estruturadas, bem como derivados de CB células T na presença das citocinas IL-7, IL-12 e IL-15. 10 Na segunda estimulação foi utilizado EBV-células B transformadas, ou EBV-LCL, que expressam tanto latente e antígenos líticos EBV. Ad5f35pp65-EBV-LCL transduzidas são usados para estimular as células T na presença de IL-15 na segunda estimulação. Estimulações subsequentes usam Ad5f35pp65-EBV-LCL transduzidas e IL-2.
De 50×10 6 CB células mononucleares que são capazes de gerar mais de 150 x 10 6 de vírus específicos de células T que lisam alvos pulsados antigénio e libertação de citocinas em resposta a estimulação antigénica. 11 Estas células foram fabricadas de um modo compatível com GMP utilizando somente a fracção de 20% de uma unidade de fraccionamento de sangue do cordão e foram traduzidos para o uso clínico.
Protocol
Discussion
As estratégias actuais no sentido de controlar as infecções virais após TCC pode ser eficaz, mas estão associadas com toxicidade significativa, são caros, e não conferem protecção a longo prazo contra a infecção posterior. Na verdade, o uso de algumas drogas antivirais podem limitar a expansão de células T específicas de vírus que de outra forma seria protectora 14. Outra opção é a infusão de doador derivados de vírus-células T específicas. Nós e outros autores mostraram que essas…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabalho foi financiado por uma L. Dan Duncan colaborativo bolsa de investigação (CMB e EJS), o Instituto Nacional do Coração, Pulmão e Sangue (US4HL081007), uma Leucemia e Linfoma Sociedade prêmio Acadêmico de Pesquisa Clínica (CMB), e do Instituto Nacional do Câncer (RO1 CA06150816; EJS).
Materials
| Name of reagent | Company | Catalogue number |
| RPMI 1640 | Invitrogen | 21870-076 |
| DC media | CellGenix | 20801-0500 |
| EHAA (Click’s Medium) | Irvine Scientific | 9195 |
| Human Serum | Gemini Bio Products | 100-110 |
| Gas Permeable Cultureware18 | Wilson-Wolf | 80040S |
| IL-2 | Chiron (TCH Pharmacy) | |
| IL-12 | NCI/CTEP | |
| IL-15 | CellGenix | 1013-050 |
| IL-7 | R&D | AFL207 |
| IL-1beta | R&D | AFL201 |
| IL-6 | CellGenix | 1004-050 |
| GM-CSF | TCH Pharmacy | |
| IL-4 | R&D | AFL204 |
| TNF-alpha | R&D | AFL210 |
| Ad5f35pp65 | BCM CAGT Vector Production Facility | |
| Plasma transfer set with female luer adapter | Charter Medical | 89-550-66j |
| Lymphoprep | Nycomed | 1114550 |
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