吸血鬼从细胞外液分离<em>秀丽隐杆线虫</em
Summary
模式生物<em> C.线虫</em>使用pseudocoelomic的流体作为被动的循环系统。直接测定该流体一直没有以前可能。在这里，我们提出了一种新的技术直接检测细胞外空间，并使用系统沉默信号在原则的例子作为证明RNAi反应。
Abstract
模式生物的基因听话的C.线虫提供了无数的生物学问题的洞察，启用其生成时间短，易于生长，体积小。这种体积小，但是，不允许在其他模型系统的一些技术方法。例如，在哺乳动物系统中和在植物中的接枝技术启用输血提问循环系统组合物和信令。循环系统的蠕虫病毒，pseudocoelom，直到最近是不可能的直接检测。回答问题间的信令和循环系统组成C.线虫的研究人员已经转向传统的遗传分析，细胞/组织特定的救援，马赛克分析。这些技术提供了一种手段来推断细胞之间发生了什么事，但不是普遍适用于细胞外分子的识别和表征。在这里，我们提出了一个NEWLY开发的技术直接测定pseudocoelomic的流体的C.线虫 。该技术开始与任一遗传或物理处理，增加细胞外液的体积。随后的动物受到吸血鬼反向显微注射技术，使用一个微妙的平衡压力控制的显微注射钻机，允许的。细胞外液分离后，可以通过转移到其他的动物，或通过分子装置测定所收集的流体。为了证明这一技术的有效性，我们提出了一个详细的方法测定细胞外的信号分子，长dsRNA的具体示例的系统性RNAi反应期间。虽然系统性的RNAi技术鉴定证明的原则，例如，我们可以看到这种技术为适应解答各种循环系统的组成和信号的问题。
Protocol
Discussion
我们已经提出了一种新的方法，使细胞外液的分离和表征从模式生物C.在这里线虫 。该技术开始与遗传或物理处理的供体虫，以增加他们的细胞外液的总体积。细胞外液，然后使用修改后的显微注射技术分离。该蠕虫安装用于显微注射举行的蠕虫病毒仍然在手术过程中使用干的琼脂糖凝胶垫。静水压力保持蠕虫的干垫垫的物理连接使用的干燥剂。这提出了一个挑战，因为一旦蠕虫安?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
我们要感谢的猎人实验室的合作性质，并感谢他们的有益的讨论和帮助，使这一技术的发展可能和乐趣。我们要感谢奈杰尔·德莱尼和秀丽隐杆线虫蠕虫病毒和细菌株的遗传学中心。这项工作是由美国国立卫生研究院GM089795拨款，以CPH。
Materials
| Day | Worm Prep | Material Prep |
| -7 or prior | Maintain clean, well fed clr-1(e1745) and N2 worms | Make injection pads, NGM plates, NGM +Carb/IPTG plates, OP50 LB stock |
| -6 | Streak out RNAi food on LB + Carb | |
| -5 | Inoculate 3 mL overnight with RNAi food | |
| -4 | Move embryos to RNAi plate | Seed RNAi plate |
| -3 | ||
| -2 | ||
| -1 | ||
| 0 | Shift worms to 25 for 4 hours | Make assay plates |
| Move worms to clean NGM plates | ||
| Vampiric transfer | ||
| Recover recipient | ||
| +1 | Remove transfer recipient | |
| +2 | Score Progeny |
Table 1. Material preparation timeline.
| Equipment | Company | Catalogue number |
| Picoliter Pressure Injector | Warner Instruments | 65-0001 (PLI-100) |
| Flaming/Brown micropipette Puller | Sutter Instruments | P97 |
| Axiovert 200 | Zeiss | |
| Reagents | ||
| Mineral Oil | EM Science | MX1560-1 |
| 22×50 no 1½ Cover Glass | Corning | |
| SeaKem LE Agarose | Lonza | 50004 |
| Borosilicate Glass Capillaries | World Precisions Instruments | 1B100F-4 |
| Sodium Hypochlorite Solution (5% available Chlorine) | J.T. Baker | 9416-01 |
| C. elegans and Bacterial Strains | ||
| clr-1(e1745)II 9 | The Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | CB3241 |
| glp-1 RNAi vector 10 | Source Bioscience (Ahringer Feeding Library) | F02A9.6 |
| pal-1 RNAi vector11 | pHC187 | |
| OP50-GFP 5 | The Caenorhabditis Genetics Center (CGC) | OP50-GFP |
| YFP E. coli 4 | MC4100-YFP | |
Table 2. Specific reagents and equipment.
References
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