一酸化窒素の生物活性をアッセイするための分析手法
Summary
一酸化窒素（NO）の内因性産生は、生物多様な機能を調節する。それは、NOベースのシグナリングの中断または調節不全は、多くのヒト疾患に関与していることがますます明らかになりつつあります。関連するNOの代謝産物を定量化しないための方法は、ヒトの疾患の新しい診断または予後バイオマーカーを提供することがあります。
Abstract
一酸化窒素（NO）は1（血液の循環で1秒未満）、生物学的システムに住んでいた非常に短い二原子フリーラジカルです。 NOは含めて本質的な機能を調節する、私たちの体内で作ら最も重要なシグナル伝達分子の一つと考えられませんが、血圧、免疫応答と神経通信の規制に限定されない可能性があります。したがって、生体マトリックスでの正確な検出および定量は、健康と疾患におけるNOの役割を理解することが重要です。 NOのような短い生理的半減期で、NO生化学の反応生成物を検出するための代替戦略が開発されている。複数の生物学的区画内の関連するNO代謝産物の定量化は、 生体内で生産、生物学的利用能および代謝NOに関して貴重な情報を提供します。単にそのような血液または血漿のような単一コンパートメントをサンプリングすると、常に全体のBOの正確な評価を提供することはできません特に組織中のNOのステータスを、DYはありません。実験動物の選択組織と血液を比較する能力は、はるかに健康と病気におけるNOのバイオマーカーの診断および予後診断ユーティリティなどの基礎科学と臨床医学の間のギャップを埋めるのに役立ちます。したがって、興味のある特定の組織へ血漿又は血液の外挿なしの状態は、もはや有効なアプローチではありません。結果として、メソッドを開発し、in vivoでの実験動物の複数の区画内のNOとNO関連製品/代謝物の検出および定量化が許可されて検証され続けています。と硝酸塩（NO 3 – ） –亜硝酸（NO 2）にNO合成酵素によって生産からの可溶性グアニル酸シクラーゼ（sGC）の活性化への最終的な酸化にNO生化学の確立されたパラダイムは、in vivoでの NOの影響の一部を表すことができる。 S-nitrosothiを形成するタンパク質のチオール基、二級アミンと金属とのNOとNO由来の代謝物の相互作用OLS（RSNOs）、N-ニトロソアミン（RNNOs）、およびニトロシルヘムは、それぞれのNOのcGMP依存しない効果を表しており、NOによるSGCの活性化として、生理学的に可能性が同様に重要である。生理中のNOの真の理解は、同時に複数のコンパートメントをサンプリングin vivo実験から導出されます。一酸化窒素（NO）の手法は複雑で、しばしば混乱の科学と多くの議論とNO生化学に関するません議論の焦点となっています。我々の能力特異的に上のNOのヒンジを伴わない新しい機構やシグナル伝達経路の解明は、選択的かつ高感度検出とNOと関連するすべての複雑な生体マトリックス中のNOの製品や代謝産物を定量化する。ここでは、高速液体クロマトグラフィーによる亜硝酸及び硝酸の迅速かつ高感度分析のための方法と同様のNO分子のソースなどのex vivoで決定するために、化学derivitazationとin vitroでのオゾンベースの化学発光で使用して生体試料中の遊離NOの検出を発表臓器浴筋運動記録法。
Protocol
Discussion
複数の生物学的区画内の関連するNO代謝産物の定量化のためにここで説明する方法は、内皮細胞によるNOの機能的な測定値と相関させることができ、健康と疾患におけるNOの生物学のフィンガープリントが可能になる。これらのメソッドは、高スループットのために適応させるための可能性のあるシンプルなサンプル調製を必要とします。これらの分子の相対量は、病気の実験モデルとヒト患?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者らは、香港江博士に感謝したいと思いますとディーパParathasarthy、MPHは、技術支援のためのBDS。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| N-ethylmaleimide | Thermo Scientific | 23030 |
| EDTA | Sigma-Aldrich | E7889 |
| Potassium Ferricyanide | Fluka | 60299 |
| HPLC | Eicom Corp | ENO-20 |
| Autosampler | Alcott | |
| DMT Myograph | AD Instruments | |
| PowerLab | AD Instruments | |
| Chemiluminescent | EcoPhysics | CLD 88Y |
| Centrifuge | Eppendorf | 5415D |
| Acetylcholine | Sigma-Aldrich | A6625 |
| R-(-) Phenylephrine | Sigma-Aldrich | P6126 |
References
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