Die Messung linksventrikulärer Druck in der späten embryonalen und neugeborenen Mäusen
Summary
Messen Drucks der linken Herzkammer (LV) in der embryonalen und neugeborenen Mäusen beschrieben. Der Druck wird durch Einführen einer Nadel mit einem Fluid gefüllten Wandler in der LV unter Ultraschallführung gemessen. Es ist darauf zu normaler Herzfunktion während des experimentellen Protokolls zu halten.
Abstract
Der Blutdruck steigt deutlich während der embryonalen und postnatalen Entwicklung bei Wirbeltieren. Bei der Maus ist der Blutfluss erste nachweisbare rund embryonalen Tag (E) 8.5 1. Systolischer linksventrikulärer (LV) Druck ist bei 2 mmHg und 11 mmHg E9.5 an E14.5 2. An diesen mittleren Embryonalstadien ist der LV deutlich sichtbar durch die Brustwand für invasive Druckmessungen, da die Rippen und die Haut noch nicht voll entwickelt sind. Zwischen E14.5 und Geburt (etwa E21) bildgebende Verfahren zu verwenden, um die LV ansehen zu können. Nach der Geburt, des mittleren arteriellen Druck steigt von 30 bis 70 mmHg aus postnatalen Tag (P) 2 – 35 3. Jenseits von P20, kann arteriellen Druck mit Solid-State-Katheter (dh Millar oder Scisense) gemessen werden. Bevor P20, sind diese Katheter zu groß für die Entwicklung der Maus Arterien und arteriellen Druck zu messen mit benutzerdefinierten gezogen Kunststoff-Katheter an Flüssigkeit gefüllte Druckaufnehmern 3 oder Glasmikropipetten att werdenschmerzte zu Servo null Druckaufnehmer 4.
Unsere jüngsten Arbeiten hat gezeigt, dass der größte Anstieg des Blutdrucks während der späten embryonalen zu frühen postnatalen Phase bei Mäusen 5-7 auftritt. Dieser große Anstieg des Blutdrucks kann glatter Muskelzellen (SMC) Phänotyp bei der Entwicklung von Arterien beeinflussen und steuern wichtige Mechanotransduktion Veranstaltungen. In der menschlichen Krankheit, wo die mechanischen Eigenschaften zu entwickeln Arterien, die durch Defekte in Proteinen der extrazellulären Matrix (dh Marfan-Syndrom 8 und supravalvuläre Aortenstenose 9) gefährdet sind die rasanten Veränderungen im Blutdruck kann während dieser Frist zu Krankheits-Phänotyp und Schwere durch Veränderungen in der Mechanotransduktion beitragen Signale. Daher ist es wichtig, dass die Veränderungen des Blutdrucks während der späten embryonalen und neonatalen Zeiträume in Mausmodellen menschlicher Erkrankungen zu messen.
Wir beschreiben eine Methode zur Messung LV Druck im spätenembryonalen (E18) und der frühen postnatalen (P1 – 20) Mäusen. Eine Nadel, die an einem mit Flüssigkeit gefüllten Druckwandler in der LV unter Ultraschallführung eingefügt. Es wird darauf geachtet, um normale Herzfunktion während der experimentellen Protokoll halten, besonders für die embryonale Mäuse. Repräsentative Daten präsentiert und Einschränkungen des Protokolls diskutiert.
Protocol
Discussion
Das Protokoll hier vorgestellten stellt ein Verfahren zum Messen LV Druck in späten und frühen embryonalen neugeborenen Mäusen. Die wichtigste Einschränkung dieses Protokolls ist die zeitliche Auflösung des Drucksystems. Das Drucksignal wird gedämpft, da es von der LV bewegt sich durch die Nadel an den Wandler, und nur der mittlere Druck-Werte aufgezeichnet werden können. Die Dämpfung kann mit der größten Nadel möglich minimiert werden, sondern muss die Nadel innerhalb des LV Lumen für verschiedene alte Mäu…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Diese Arbeit wurde finanziert, zum Teil durch Zuschüsse NIH HL087653 und HL105314. Einige der Methoden wurden im Labor von Dr. Robert Mecham an der Washington University School of Medicine entwickelt.
Materials
| Name of the reagent/equipment | Company | Catalogue number | Comments |
| High resolution ultrasound system | Visualsonics | Vevo 770 | Or other appropriate ultrasound system |
| High frequency ultrasound probes | Visualsonics | 708 and 707B | |
| Imaging platform and injection arm | Visualsonics | Imaging Station 2 | With ECG and temperature feedback control of platform |
| Pressure transducer | AD Instruments | MLT 844 | |
| Bridge amplifier | AD Instruments | ML221 | |
| Data acquisition system | AD Instruments | ML866 | |
| Data recording software | AD Instruments | LabChart | |
| Ring stand and clamp | Various suppliers | To hold pressure transducer during measurements | |
| 3-way stopcocks with luer connections, male lock | Cole Parmer | 30600-02 | |
| 1/16″ ID Tygon Tubing | Cole Parmer | 06408 | |
| Male and female luers w/ 1/16″ hose barb | Cole Parmer | 45510-50 45510-00 | |
| 24″ tubing with male and female luer at each end | Cole Parmer | 30600-60 | |
| 3 and 10 mL syringes | BD Biosciences | ||
| 30 and 25G needles | BD Biosciences | 1.5 inches in length | |
| Big Ben manometer | Riester | 1456-100 | |
| Saline | Various suppliers | ||
| Heparin | Various suppliers | ||
| Ultrasound gel | Parker | Aquasonic 100 | |
| Hair remover lotion | Nair |
References
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