Синтез<em> В естественных условиях</em> МРТ обнаруживаются Апоптоз Probe
Summary
Раннее выявление апоптоза может выявить группы риска клетки в самых разных заболеваний. Здесь мы покажем способ связать ранний апоптоз обнаружения белка (Аннексин V) к МРТ обнаруживаются наночастицы оксида железа (Спио). Этот метод может быть распространен и на другие белки, представляющие интерес для создания МРТ обнаруживаются молекулярных зондов изображения.
Abstract
Сотовые апоптоз является характерной чертой многих заболеваний, и это запрограммированная смерть клетки обычно происходит до клинических проявлений болезни очевидны. Средства для обнаружения апоптоза в его ранних, обратимых стадиях бы позволить себе доклинических «окно» в течение которых профилактических или лечебных мероприятий могут быть приняты для защиты сердца от повреждений. Мы представляем здесь простой и надежный метод сопряженных человека Аннексин V (ANX), которые активно связывается с клетками на ранних, обратимых стадиях апоптоза, в суперпарамагнитных оксида железа (Спио) наночастиц, которые служат МРТ обнаруживаются контрастное вещество. Сопряжение метод начинается с окисления наночастиц Спио, который окисляет карбоксильных групп на полисахарид оболочки Спио. Очищенный белок ANX затем добавляется в условиях решение борат натрия для облегчения ковалентного взаимодействия с ANX Спио в восстановительной буфера. Заключительного этапа сокращения натрия borohydridэлектронной осуществляется завершить сокращение, а затем реакция угасает. Неконъюгированного ANX удаляется из микс микроцентрифужных фильтрации. Размер и чистота ANX-Спио продукт проверяется динамического рассеяния света (DLS). Этот метод не требует дополнение или изменение, полисахарид Спио оболочки, в отличие от сшитых частиц оксида железа, методы сопряжения или биотин-меченых наночастиц. В результате, этот метод представляет собой простой, надежный подход, который может быть продлен до сопряжения других белков, представляющих интерес.
Protocol
Discussion
Описанный метод сопряжения для связи Спио в Аннексин V использует боковой цепи аминогруппами Аннексин и карбоксильной фрагменты из наночастиц Спио. Через определенный окислительно-восстановительные шаги, ковалентная связь этих соединений может быть достигнуто, и в результате функци…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Национальные институты здравоохранения, NHLBI (RD, PY, PS).
Американская Ассоциация Сердца (JL).
Стэнфордский университет, VPUE Грант (JL).
Materials
| Name of Reagent | Company | Catalogue # |
| Superparamagnetic iron oxide | Ocean Nanotech, Inc. | ICK-40-005 |
| Doxorubicin | Sigma | D1515-10MG |
| SuperMag Separator | Ocean Nanotech, Inc. | N/A |
| Zetasizer Nano DLS machine | Malvern, Inc | N/A |
References
- Dash, R. A molecular MRI probe to detect treatment of cardiac apoptosis in vivo. Magn. Reson. Med. , (2011).
- Khym, J. X. The reaction of methylamine with periodate-oxidized adenosine 5′-phosphate. 생화학. 2, 344-350 (1963).
- Liu, Y. Y., Yu, Y., Zhang, G. B., Tang, M. F. Preparation, characterization, and controlled release of novel nanoparticles based on MMA/beta-CD copolymers. Macromol. Biosci. 7, 1250-1257 (2007).
- Seo, W. S. FeCo/graphitic-shell nanocrystals as advanced magnetic-resonance-imaging and near-infrared agents. Nat. Mater. 5, 971-976 (2006).
- Hsiao, J. K. Magnetic nanoparticle labeling of mesenchymal stem cells without transfection agent: cellular behavior and capability of detection with clinical 1.5 T magnetic resonance at the single cell level. Magn. Reson. Med. 58, 717-724 (2007).
- Zhao, M., Beauregard, D. A., Loizou, L., Davletov, B., Brindle, K. M. Non-invasive detection of apoptosis using magnetic resonance imaging and a targeted contrast agent. Nat. Med. 7, 1241-1244 (2001).
- van Tilborg, G. A. Internalization of annexin A5-functionalized iron oxide particles by apoptotic Jurkat cells. Contrast Media Mol. Imaging. 4, 24-32 (2009).
- Sosnovik, D. E. Magnetic resonance imaging of cardiomyocyte apoptosis with a novel magneto-optical nanoparticle. Magn. Reson. Med. 54, 718-724 (2005).
- Sosnovik, D. E. Molecular MRI detects low levels of cardiomyocyte apoptosis in a transgenic model of chronic heart failure. Circ. Cardiovasc. Imaging. 2, 468-475 (2009).
- Dumont, E. A. Cardiomyocyte death induced by myocardial ischemia and reperfusion: measurement with recombinant human annexin-V in a mouse model. Circulation. 102, 1564-1568 (2000).
- Blankenberg, F. G. In vivo detection and imaging of phosphatidylserine expression during programmed cell death. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 95, 6349-6354 (1998).
- Schellenberger, E. A., Sosnovik, D., Weissleder, R., Josephson, L. Magneto/optical annexin V, a multimodal protein. Bioconjug. Chem. 15, 1062-1067 (2004).
