उच्च throughput प्रोटीन अभिव्यक्ति मंच microfluidic नहीं एक जनरेटर का उपयोग
Summary
हम प्रोटीन की अभिव्यक्ति के लिए एक microfluidic दृष्टिकोण प्रस्तुत करते हैं. इस उपकरण में सूक्ष्म यांत्रिक वाल्व द्वारा नियंत्रित प्रतिक्रिया कक्षों के हजारों के होते हैं. microfluidic डिवाइस एक जीन माइक्रोएरे मुद्रित पुस्तकालय के लिए mated है. इन जीनों और फिर लिखित चिप पर अनुवाद कर रहे हैं, जिसके परिणामस्वरूप एक प्रोटीन सरणी में प्रयोगात्मक उपयोग के लिए तैयार है.
Abstract
सिस्टम जीव विज्ञान के रूप में तेजी से बढ़ क्षेत्रों, और नई प्रौद्योगिकियों के विकास और कार्यान्वयन की आवश्यकता होती है, बड़े सिस्टम के उच्च throughput और उच्च विश्वस्तता माप सक्षम. Microfluidics इन आवश्यकताओं के कई को पूरा करने का वादा किया है, चिप पर उच्च throughput स्क्रीनिंग प्रयोग प्रदर्शन के रूप में, जैव रासायनिक, biophysical, और सेल आधारित assays को शामिल 1. Microfluidics उपकरणों के शुरुआती दिनों के बाद से इस क्षेत्र में काफी विकसित किया गया है, microfluidic बड़े पैमाने पर 2,3 एकीकरण के विकास के लिए अग्रणी. यह प्रौद्योगिकी एक पदचिह्न डाक आकार (1 चित्रा) के साथ एक डिवाइस पर micromechanical वाल्व के हजारों के एकीकरण के लिए अनुमति देता है. हम प्रोटीन (2 चित्रा) arrays पिंग (प्रोटीन बातचीत नेटवर्क जेनरेटर) नाम के इन विट्रो अभिव्यक्ति में पैदा करने के लिए एक उच्च throughput microfluidic मंच विकसित किया है. इन arrays कई प्रयोगों के लिए एक टेम्पलेट के रूप में सेवा कर सकते हैंइस तरह के रूप में 4 प्रोटीन, प्रोटीन, 5 प्रोटीन शाही सेना या प्रोटीन डीएनए 6 बातचीत.
युक्ति कक्षों की प्रतिक्रिया हजारों है, जो व्यक्तिगत रूप एक microarrayer का उपयोग कर रहे हैं क्रमादेशित से मिलकर बनता है. एक एकल जगह संभावित संक्रमण या पार जेट इसके अलावा को नष्ट करने, मानक माइक्रोएरे खोलना तकनीक का उपयोग प्रोटीन पैदा microfluidics उपकरणों कार्यक्रमों के लिए इन मुद्रित प्रोटीन के साथ प्रत्येक कक्ष Aligning भी बहुत मॉड्यूलर, 7 प्रोटीन, 8 डीएनए, छोटे अणुओं के प्रोटीन के लिए अनुमति देता है, और यहां तक कि कोलाइडयन निलंबन. जैविक विज्ञान पर microfluidics के संभावित प्रभाव महत्वपूर्ण है. Microfluidics आधारित assays की संख्या पहले से ही और जैविक प्रणालियों की संरचना और समारोह में उपन्यास अंतर्दृष्टि प्रदान की है, और microfluidics क्षेत्र के लिए जीव विज्ञान का प्रभाव जारी रहेगा.
Protocol
Discussion
इस पत्र में हम पीढ़ी उच्च throughput में प्रोटीन microfluidic एक मंच का उपयोग करने के लिए एक विधि प्रस्तुत करते हैं. सरणी पीढ़ी के मुद्रण माइक्रोएरे डीएनए टेम्पलेट्स पर आधारित है और इन विट्रो microfluidic युक्ति भीतर डीए?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
यह काम मैरी क्यूरी अंतरराष्ट्रीय reintegration अनुदान द्वारा समर्थित किया गया.
Materials
| Reagent/Equipment | Company | Catalogue number |
| PDMS- SYLGARD 184 | Dow Corning USA | ESSEX-DC |
| Chlorotrimethylsilane (TMCS | Sigma-Aldrich | C72854 |
| Epoxy coated glass substrates | CEL Associates USA | VEPO-25C |
| Poly ethylene glycole (PEG) | Sigma-Aldrich | 81260 |
| D-trehalose dihydrate | Sigma-Aldrich | T9531 |
| Biotinylated-BSA | Pierce | PIR-29130 |
| Neutravidin | Pierce | 31050 |
| penta-His-biotin | Qiagen | 34440 |
| Hepes | Biological Industries | 03-025-1B |
| TNT-T7 | Promega | L5540 |
| C-myc Cy3 antibody | Sigma -Aldrich | |
| Control box | Stanford Microfluidics Foundry | |
| Mold | Stanford Microfluidics Foundry | |
| Pin | New England Small Tubes Corporation | |
| Tygon microbore tubing | Tygon | S-54-HL |
| Microarrayer | Bio Robotics | MicroGrid 610 |
| Silicone pins | Parallel Synthesis | SMT-S75 |
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