Proteínas de alto rendimiento del generador de expresiones utilizando una plataforma de microfluidos
Summary
Se presenta un enfoque de microfluidos para la expresión de matrices de proteínas. El dispositivo consiste en miles de cámaras de reacción controladas por micro-mecánicos válvulas. El dispositivo microfluídico está acoplado a una biblioteca de genes de microarrays-impreso. Estos genes se transcribe y se traduce en un chip, lo que resulta en una matriz de proteína listo para su uso experimental.
Abstract
Campos en rápido crecimiento, tales como la biología de sistemas, requieren el desarrollo y la implementación de nuevas tecnologías, lo que permite mediciones de alto rendimiento y alta fidelidad de los grandes sistemas. Microfluídica se compromete a cumplir muchos de estos requisitos, tales como la realización de experimentos de alto rendimiento de cribado en el chip, que abarca ensayos bioquímicos, biofísicos y basados en células-1. Desde los primeros días de los dispositivos de microfluidos, este campo ha evolucionado drásticamente, lo que lleva al desarrollo de microfluidos integración a gran escala 2,3. Esta tecnología permite la integración de miles de válvulas micromecánicos en un único dispositivo con una huella de franqueo de tamaño (Figura 1). Hemos desarrollado una plataforma microfluídica de alto rendimiento para la generación de la expresión in vitro de matrices de proteínas (Figura 2) con nombre PING (interacción proteína Generador de red). Estas matrices pueden servir como una plantilla para muchos experimentostales como la proteína-proteína 4, proteína-ARN 5 o proteína de ADN 6 interacciones.
El dispositivo consiste de miles de cámaras de reacción, que están programados individualmente utilizando una microarrayer. Alineación de estos microarrays impresos a los dispositivos de microfluidos programas de cada cámara con una sola mancha eliminación de la contaminación potencial de reactividad cruzada o más, para generar micromatrices utilizando técnicas estándar de microarrays manchado es también muy modular, lo que permite la arraying de proteínas, ADN 7 8, moléculas pequeñas, e incluso suspensiones coloidales. El impacto potencial de la microfluídica en las ciencias biológicas es importante. Una serie de ensayos basados en microfluídica ya han proporcionado nuevos conocimientos sobre la estructura y función de los sistemas biológicos, y el campo de la microfluídica, seguirá afectando la biología.
Protocol
Discussion
En este trabajo se presenta un método para la generación de matrices de proteínas de alto rendimiento mediante una plataforma de microfluidos. La generación de matriz se basa en la impresión de microarrays de plantillas de ADN y en la expresión de proteínas in vitro a partir del ADN dentro del dispositivo de microfluidos.
Nuestra plataforma de microfluidos novela tiene varias ventajas importantes sobre los métodos actualmente utilizados, que lo convierten en una her…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Este trabajo fue apoyado por Marie Curie internacional reintegración subvención.
Materials
| Reagent/Equipment | Company | Catalogue number |
| PDMS- SYLGARD 184 | Dow Corning USA | ESSEX-DC |
| Chlorotrimethylsilane (TMCS | Sigma-Aldrich | C72854 |
| Epoxy coated glass substrates | CEL Associates USA | VEPO-25C |
| Poly ethylene glycole (PEG) | Sigma-Aldrich | 81260 |
| D-trehalose dihydrate | Sigma-Aldrich | T9531 |
| Biotinylated-BSA | Pierce | PIR-29130 |
| Neutravidin | Pierce | 31050 |
| penta-His-biotin | Qiagen | 34440 |
| Hepes | Biological Industries | 03-025-1B |
| TNT-T7 | Promega | L5540 |
| C-myc Cy3 antibody | Sigma -Aldrich | |
| Control box | Stanford Microfluidics Foundry | |
| Mold | Stanford Microfluidics Foundry | |
| Pin | New England Small Tubes Corporation | |
| Tygon microbore tubing | Tygon | S-54-HL |
| Microarrayer | Bio Robotics | MicroGrid 610 |
| Silicone pins | Parallel Synthesis | SMT-S75 |
References
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