هنا نقدم منخفضة التكلفة، ومتحمل البرد جهاز دائم لاسترجاع عينة من خزانات مليئة ديوار النيتروجين السائل. سهولة البناء وتصميم وحدات الجهاز يجعل من عملية استرجاع عينة من الدبابات المبردة آمنة وسهلة.
Abstract
النيتروجين السائل هو عديم اللون، عديم الرائحة، بارد جدا (-196 درجة مئوية) السائلة أبقى تحت الضغط. ويشيع استخدام هذا كسائل المبردة لتخزين على المدى الطويل من مواد بيولوجية مثل خلايا الدم والأنسجة 1،2. طبيعة المبردة من النيتروجين السائل، في حين المثالي لحفظ عينة، يمكن أن يسبب التجميد السريع للأنسجة الحية في الاتصال – المعروفة باسم 'حرق المبردة "2، والذي قد يؤدي إلى قضمة الصقيع الشديد في الأشخاص الذين يشاركون عن كثب في تخزين واسترجاع عينات من Dewars. وبالإضافة إلى ذلك، والنيتروجين السائل يتبخر أنه يقلل من تركيز الأوكسجين في الهواء، وربما يسبب الاختناق، وخاصة في الأماكن الضيقة 2.
في المختبرات، وغالبا ما يتم تخزين العينات البيولوجية في cryovials أو cryoboxes مكدسة في الرفوف الفولاذ المقاوم للصدأ داخل الدبابات ديوار 1. وتقدم هذه رفوف التخزين مع رمح طويل لمنع مربعات من الانزلاق الخروج من الرفوف والى الجزء السفلي منDewars خلال التعامل مع الروتين. في كثير من الأحيان، ومع ذلك، وعلب أو قوارير مع العينات الثمينة تفلت وتنزل الى القاع من خزان النتروجين السائل شغلها. في مثل هذه الحالات، يمكن أن عينات استرجاع مضجر بعد نقل النيتروجين السائل في وعاء الغيار أو رميه. يمكن للصناديق وقارورة ثم تكون بأمان نسبيا تعافى من ديوار تفرغ. ومع ذلك، فإن طبيعة المبردة من النيتروجين السائل ومعدل توسع يجعل الغارقة الخطرة استرجاع العينة. ويوصى عادة من قبل مكاتب السلامة أن يتم أبدا تنفيذ استرجاع عينة من قبل شخص واحد. وثمة بديل آخر يتمثل في استخدام الأيادي بارد المتاحة تجاريا أو ملقط لسحب قوارير 3. ومع ذلك، الرؤية محدودة داخل Dewars سائل مظلم شغل يشكل عائقا كبيرا في استخدامها.
في هذه المقالة، ونحن تصف بناء جهاز متحمل البرد استرجاع DIY، الأمر الذي يجعل استرجاع عينة من السوائل المبردة ديوار التي تحتوي على كل من آمن 1الثانية وسهل.
Protocol
1. تجميع الأجهزة متحمل البرد لاسترجاع Cryoboxes باستخدام كماشة، تصويب جانب واحد من 3 جانب قوي التعادل (الشكل 1A) لتقديم مذكرة L قوي التعادل على شكل مبين في الشكل 1B: يمكن تحديد أبعاد تحالف قوي اعتماد…
Discussion
إحدى الطرق الأكثر شيوعا لاسترداد cryoboxes وcryovials من قاع الخزان ديوار هو صب النتروجين السائل في وعاء الغيار وسحب العينات المتبقية في قارورة أو طافية في النيتروجين السائل يصب. هذا، مع ذلك، من الممارسات غير الآمنة التي يمكن أن تسبب حروقا المبردة أو الاختناق بسبب التعرض لفت…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقد تم اختبار الجهاز DIY استرجاع المبردة في سياق مشاريع "prenylation نمذجة البروتين البكتيري في الخلايا حقيقية النواة استخدام المعلوماتية الحيوية والنهج الجزيئي" التي ترعاها جائزة ماري لويز أندروز لبرنامج أبحاث السرطان، فرجينيا أكاديمية العلوم "، مما يعني الفسيولوجية لتحرير الحمض النووي الريبي في البلازما شجيري خلايا "برعاية Jeffress F. توماس وكيت ميلر Jeffress الثقة التذكارية وعقد 16.740.11.0364 الدولة (وزارة العلوم والتربية، وروسيا). نود أن نشكر بيت بعثة مراقبة الانتخابات للحصول على المساعدة مع تجربة سلامة الحمض النووي الريبي.
Materials
Name of the reagent
Company
Catalogue number
Comments
Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 feet; 14 Gauge
Local Hardware shop
N/A
1 unit required
Crown Bolt Stainless Steel #6 – 32 x 3/8 in. Oval Head Phillips Drive Machine Screw
Local Hardware shop
Model # 42281
4 units required
Crown Bolt 3/8 in. x 1-1/2 in. Zinc-Plated Steel Fender Washers
Mehta, R., Baranova, A., Birerdinc, A. Do-It-Yourself Device for Recovery of Cryopreserved Samples Accidentally Dropped into Cryogenic Storage Tanks. J. Vis. Exp. (63), e3903, doi:10.3791/3903 (2012).