افعل ذلك بنفسك جهاز لاستخراج العينات Cryopreserved سقطت سهوا في صهاريج التخزين المبردة
Summary
هنا نقدم منخفضة التكلفة، ومتحمل البرد جهاز دائم لاسترجاع عينة من خزانات مليئة ديوار النيتروجين السائل. سهولة البناء وتصميم وحدات الجهاز يجعل من عملية استرجاع عينة من الدبابات المبردة آمنة وسهلة.
Abstract
النيتروجين السائل هو عديم اللون، عديم الرائحة، بارد جدا (-196 درجة مئوية) السائلة أبقى تحت الضغط. ويشيع استخدام هذا كسائل المبردة لتخزين على المدى الطويل من مواد بيولوجية مثل خلايا الدم والأنسجة 1،2. طبيعة المبردة من النيتروجين السائل، في حين المثالي لحفظ عينة، يمكن أن يسبب التجميد السريع للأنسجة الحية في الاتصال – المعروفة باسم 'حرق المبردة "2، والذي قد يؤدي إلى قضمة الصقيع الشديد في الأشخاص الذين يشاركون عن كثب في تخزين واسترجاع عينات من Dewars. وبالإضافة إلى ذلك، والنيتروجين السائل يتبخر أنه يقلل من تركيز الأوكسجين في الهواء، وربما يسبب الاختناق، وخاصة في الأماكن الضيقة 2.
في المختبرات، وغالبا ما يتم تخزين العينات البيولوجية في cryovials أو cryoboxes مكدسة في الرفوف الفولاذ المقاوم للصدأ داخل الدبابات ديوار 1. وتقدم هذه رفوف التخزين مع رمح طويل لمنع مربعات من الانزلاق الخروج من الرفوف والى الجزء السفلي منDewars خلال التعامل مع الروتين. في كثير من الأحيان، ومع ذلك، وعلب أو قوارير مع العينات الثمينة تفلت وتنزل الى القاع من خزان النتروجين السائل شغلها. في مثل هذه الحالات، يمكن أن عينات استرجاع مضجر بعد نقل النيتروجين السائل في وعاء الغيار أو رميه. يمكن للصناديق وقارورة ثم تكون بأمان نسبيا تعافى من ديوار تفرغ. ومع ذلك، فإن طبيعة المبردة من النيتروجين السائل ومعدل توسع يجعل الغارقة الخطرة استرجاع العينة. ويوصى عادة من قبل مكاتب السلامة أن يتم أبدا تنفيذ استرجاع عينة من قبل شخص واحد. وثمة بديل آخر يتمثل في استخدام الأيادي بارد المتاحة تجاريا أو ملقط لسحب قوارير 3. ومع ذلك، الرؤية محدودة داخل Dewars سائل مظلم شغل يشكل عائقا كبيرا في استخدامها.
في هذه المقالة، ونحن تصف بناء جهاز متحمل البرد استرجاع DIY، الأمر الذي يجعل استرجاع عينة من السوائل المبردة ديوار التي تحتوي على كل من آمن 1الثانية وسهل.
Protocol
Discussion
إحدى الطرق الأكثر شيوعا لاسترداد cryoboxes وcryovials من قاع الخزان ديوار هو صب النتروجين السائل في وعاء الغيار وسحب العينات المتبقية في قارورة أو طافية في النيتروجين السائل يصب. هذا، مع ذلك، من الممارسات غير الآمنة التي يمكن أن تسبب حروقا المبردة أو الاختناق بسبب التعرض لفت…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وقد تم اختبار الجهاز DIY استرجاع المبردة في سياق مشاريع "prenylation نمذجة البروتين البكتيري في الخلايا حقيقية النواة استخدام المعلوماتية الحيوية والنهج الجزيئي" التي ترعاها جائزة ماري لويز أندروز لبرنامج أبحاث السرطان، فرجينيا أكاديمية العلوم "، مما يعني الفسيولوجية لتحرير الحمض النووي الريبي في البلازما شجيري خلايا "برعاية Jeffress F. توماس وكيت ميلر Jeffress الثقة التذكارية وعقد 16.740.11.0364 الدولة (وزارة العلوم والتربية، وروسيا). نود أن نشكر بيت بعثة مراقبة الانتخابات للحصول على المساعدة مع تجربة سلامة الحمض النووي الريبي.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 feet; 14 Gauge | Local Hardware shop | N/A | 1 unit required |
| Crown Bolt Stainless Steel #6 – 32 x 3/8 in. Oval Head Phillips Drive Machine Screw | Local Hardware shop | Model # 42281 | 4 units required |
| Crown Bolt 3/8 in. x 1-1/2 in. Zinc-Plated Steel Fender Washers | Local Hardware shop | Model # 20122 | 4 units required |
| Crown Bolt Zinc Plated #8-32 Machine Screw Nut | Local Hardware shop | Model # 18512 | 4 units required |
| Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 in. Half Base | Local Hardware shop | Model # BC40Z | 2 units required |
| Simpson Strong-Tie 6 in. x 6 in. T Strap | Local Hardware shop | Model # 66T | 1 unit required |
| Oneida 6″ Mesh Strainer | Local Grocery shop | Model # 7859W | 1 unit required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Nuts 3/8-16 | Local Hardware shop | Model #:810509 | 6 units required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Bolts 3/8- 16 | Local Hardware shop | 4 units required | |
| Foam for insulation | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Screw Driver | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Pliers | Local Hardware shop | 1 unit required |
References
- Kittel, P. . Advances in Cryogenic Engineering. , 41 (1996).
- Edeskuty, F. J., Walter, F. . Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , (1996).
- Council, N. R. . Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards. , (2011).
- Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies. Diagnostic Pathology. 4, 9 (2009).
- Sambrook, J., Russell, D. W. . Molecular cloning: a laboratory manual. , (2001).
- Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies. Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).
- Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. Encyclopedia of Rose Science. , 106-111 (2003).
- Crawford, R. J. . Plastics Engineering. , (1998).
- Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. . Steel designers’ handbook. , (1996).
- Harper, C. A., Petrie, E. M. Plastics materials and processes: a concise encyclopedia. Wiley-Interscience. , (2003).
