עשה זאת בעצמך התקן להבראת דוגמאות Cryopreserved בטעות ירד לתוך טנקים אחסון קריוגני
Summary
כאן אנו מציגים בעלות נמוכה, המכשיר עמיד cryotolerant לאחזור מדגם טנקים דיואר מלא חנקן נוזלי. קלות הבנייה העיצוב המודולרי של המכשיר הופך את תהליך אחזור מדגם ומכלי קירור קלה ובטוחה.
Abstract
חנקן נוזלי הוא חסר צבע, חסר ריח, קר מאוד (-196 ° C) נוזלי כל הזמן תחת לחץ. זה הוא נפוץ כמו נוזל קירור לאחסון לטווח ארוך של חומרים ביולוגיים, כגון כדוריות הדם 1,2 רקמות. הטבע קריוגני של חנקן נוזלי, בעוד אידיאלי לשימור הדגימה, יכול לגרום הקפאה מהירה של רקמות חיות על קשר – המכונה "קריוגני לשרוף '2, אשר עשוי להוביל כוויות קור קשות בבני אדם מעורב מקרוב אחסון ואחזור של דגימות Dewars. בנוסף, כמו חנקן נוזלי מתאדה היא מפחיתה את ריכוז החמצן באוויר ועלולים לגרום חנק, במיוחד בחללים סגורים 2.
במעבדות, דגימות ביולוגיות מאוחסנות בדרך כלל cryovials או cryoboxes מוערמים על מדפי נירוסטה בתוך הטנקים דיואר 1. מתלים אלו אחסון מסופקים עם מוט ארוך על מנת למנוע החלקת תיבות מן המדפים את בתחתיתDewars במהלך טיפול שגרתי. לעתים קרובות מדי, עם זאת, תיבות או צלוחיות עם דגימות יקרות להחליק החוצה לשקוע בתחתית המכל מלא חנקן נוזלי. במקרים כאלה, דוגמאות אפשר היה לאחזר לעייפה לאחר העברת חנקן נוזלי לתוך מיכל רזרבי או ביטול זה. את קופסאות צלוחיות אז יכול להיות התאושש יחסית בשלום דיואר התרוקן. עם זאת, אופי קריוגני של חנקן נוזלי קצב ההתפשטות שלה עושה את מסוכנים שקועות אחזור לדוגמה. מומלץ בדרך כלל על ידי משרד הבטיחות מדגם אף פעם לא אחזור להתבצע על ידי אדם אחד. חלופה נוספת היא להשתמש grabbers מגניב זמינים מסחרית או מלקחיים כדי לשלוף את צלוחיות 3. עם זאת, הראות מוגבלת בתוך Dewars כהים מלאים נוזל מהווה מגבלה משמעותית את השימוש בהם.
במאמר זה, אנו מתארים את הבנייה של המכשיר DIY Cryotolerant אחזור, מה שהופך אחזור מדגם דיואר המכיל נוזלים קריוגני הן בטוחותND קלים.
Protocol
Discussion
אחת השיטות הנפוצות ביותר של אחזור cryoboxes ו cryovials מהחלק התחתון של הטנק דיואר היא למזוג חנקן נוזלי לתוך מיכל רזרבי ולשלוף את הדגימות שנותרו בבקבוק או צף חנקן נוזלי יצק. זהו, עם זאת, בפועל לא בטוח שעלול לגרום לכוויות קריוגני או מחנק עקב חשיפה ממושכת אדי חנקן נוזלי 2. ד?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
עשה זאת בעצמך מכשיר קריוגני אחזור נבדקו במהלך הפרויקטים "חלבון חיידקי דוגמנות prenylation בתאים האיקריוטים באמצעות ביואינפורמטיקה גישות מולקולריות" בחסות פרס מרי לואיז אנדרוז תוכנית לחקר הסרטן, וירג'יניה האקדמיה למדעים ", כלומר הפיזיולוגי של עריכת רנ"א בפלסמה תאים דנדריטים "בחסות פ תומאס Jeffress וקייט מילר Jeffress הזיכרון אמון חוזה המדינה 16.740.11.0364 (משרד המדע החינוך, רוסיה). אנו רוצים להודות בית המשקיפים על הסיוע בניסוי שלמות RNA.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Hillman Group Plated Slotted Flat 1-3/8 x 4 feet; 14 Gauge | Local Hardware shop | N/A | 1 unit required |
| Crown Bolt Stainless Steel #6 – 32 x 3/8 in. Oval Head Phillips Drive Machine Screw | Local Hardware shop | Model # 42281 | 4 units required |
| Crown Bolt 3/8 in. x 1-1/2 in. Zinc-Plated Steel Fender Washers | Local Hardware shop | Model # 20122 | 4 units required |
| Crown Bolt Zinc Plated #8-32 Machine Screw Nut | Local Hardware shop | Model # 18512 | 4 units required |
| Simpson Strong-Tie BC40Z 4 In.x4 in. Half Base | Local Hardware shop | Model # BC40Z | 2 units required |
| Simpson Strong-Tie 6 in. x 6 in. T Strap | Local Hardware shop | Model # 66T | 1 unit required |
| Oneida 6″ Mesh Strainer | Local Grocery shop | Model # 7859W | 1 unit required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Nuts 3/8-16 | Local Hardware shop | Model #:810509 | 6 units required |
| The Hillman Group Galvanized Hex Bolts 3/8- 16 | Local Hardware shop | 4 units required | |
| Foam for insulation | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Screw Driver | Local Hardware shop | 1 unit required | |
| Pliers | Local Hardware shop | 1 unit required |
References
- Kittel, P. . Advances in Cryogenic Engineering. , 41 (1996).
- Edeskuty, F. J., Walter, F. . Stewart Safety in the handling of cryogenic fluids. , (1996).
- Council, N. R. . Prudent Practices in the Laboratory: Handling and Management of Chemical Hazards. , (2011).
- Muyal, J., Muyal, V., Kaistha, B., Seifart, C., Fehrenbach, H. Systematic comparison of RNA extraction techniques from frozen and fresh lung tissues: checkpoint towards gene expression studies. Diagnostic Pathology. 4, 9 (2009).
- Sambrook, J., Russell, D. W. . Molecular cloning: a laboratory manual. , (2001).
- Holland, N. T., Smith, M. T., Eskenazi, B., Bastaki, M. Biological sample collection and processing for molecular epidemiological studies. Mutation Research/Reviews in Mutation Research. 543, 217-234 (2003).
- Lynch, P. T. CELL, TISSUE AND ORGAN CULTURE | Storage and Cryopreservation. Encyclopedia of Rose Science. , 106-111 (2003).
- Crawford, R. J. . Plastics Engineering. , (1998).
- Gorenc, B., Tinyou, R., Syam, A. . Steel designers’ handbook. , (1996).
- Harper, C. A., Petrie, E. M. Plastics materials and processes: a concise encyclopedia. Wiley-Interscience. , (2003).
