باستخدام بويضات من<em> البلهارسيا المنسونية</em> ك<em> في الجسم الحي</em> نموذج من التهاب الرئة الناجم عن الديدان الطفيلية
Summary
بيض البلهارسيا المنسونية والتحفيز والتشجيع قوي من نوع المساعد تي 2 (TH2) استجابة جهاز المناعة، سمة من العدوى الطفيلية، والربو والالتهاب التحسسي. ويستخدم هذا البروتوكول س. المنسونية بيضة حقن لتوليد CD4 TH2 خلوى بفعل الاستجابة الالتهابية في الرئة، وتتميز تشكيل الحبيبي الرئة في جميع أنحاء البيض، كثرة اليوزينيات وتنشيط البلاعم بديل.
Abstract
طفيليات البلهارسيا والديدان المثقوبة الدم الذي يصيب ما يقدر بنحو 200 مليون شخص في جميع أنحاء العالم 1. في عدوى مزمنة مع البلهارسيا، وأمراض خطيرة، بما في ذلك تليف الكبد وتضخم الطحال، والناجمة عن رد الفعل المناعي للبيض الطفيلي بدلا من الطفيليات نفسها 2. بيض طفيلي حث استجابة Th2 يتميز إنتاج IL-4، IL-5، وايل 13، وتفعيل البديل الضامة وتجنيد الحمضات. هنا، نحن تصف حقن بيض البلهارسية المنسونية كنموذج لدراسة الطفيليات محددة استجابات TH2 خلوى في الرئة والغدد الليمفاوية استنزاف، وتشكيل حبيبية رئوي المحيطة البيض، والتهاب الشعب الهوائية.
بعد توعية داخل الصفاق والتحدي في الوريد، S. ويتم نقل البيض المنسونية إلى الرئة عن طريق الشريان الرئوي حيث هم محاصرون داخل حمة الرئةبواسطة حبيبية تتألف من الخلايا الليمفاوية، الحمضات والضامة تفعيلها بدلا من 3-6. المرتبطة التهاب الحبيبي، وتشكيل في المساحات الشعبة الهوائية السنخية، ويمكن التوسع في الغدد الليمفاوية واستنزاف CD4 يمكن ملاحظة تي تنشيط الخلايا. نحن هنا بالتفصيل بروتوكول لعزل بيض البلهارسيا المنسونية من الأكباد المصابة (تعديل من 7)، وتوعية وتحدي الفئران، واستعادة أجهزة (الشعبة الهوائية غسل السنخية (بال) والرئة والغدد الليمفاوية تصريف) للتحليل. نحن تشمل أيضا نسيجية ممثل والبيانات المناعية واقتراحات لتحليل مناعية إضافية.
عموما، هذه الطريقة توفر في نموذج الجسم الحي للتحقيق استجابات مناعية الديدان الطفيلية التي يسببها في الرئة، والتي تنطبق على نطاق واسع لدراسة الأمراض الالتهابية TH2 بما في ذلك عدوى الديدان الطفيلية، والأمراض متليفة، التهاب الحساسية والربو. مزايا هذا النموذج لدراسة الطباعE 2 التهاب في الرئة وتشمل استنساخ استجابة قوية للالتهابات TH2 في الرئة والغدد الليمفاوية استنزاف، وسهولة تقييم التهاب عن طريق الفحص نسيجية من حبيبية المحيطة البيض، وإمكانات التخزين الطويل الأجل للطفيلي بيض.
Protocol
Discussion
هنا، يوصف نموذج توظيف بيض البلهارسيا المنسونية للحث على نوع التهاب الرئة 2. السمات المميزة لهذا النموذج وتشمل استجابة مناعية قوية TH2، التهاب الشعب الهوائية والرئة تشكيل الحبيبي. وبما أن هذه المعايير تعتمد على ردود CD4 الخلية TH2 11، هذا هو نموذج مفيدة للتحقيق ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
وأيد هذا العمل من قبل المعاهد الوطنية للصحة (NIH) AI091759 وكرون والتهاب القولون من مؤسسة وليام أميركا وشيلبي Modell مؤسسة أبحاث العائلة جائزة (لMN). تم تزويد البلهارسيا المصابين الفئران عن طريق مركز الموارد البلهارسيا المعدية (العقد NIAID N01 A130026).
Materials
| Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
| Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
| Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
| Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
| Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
| Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
| RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
| Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
| USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
| Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |
References
- World Health Organization. Prevention and control of schistosomiasis and soil-transmitted helminthiasis: report of a WHO expert committee. WHO Technical Report Series 912. , (2002).
- Pearce, E. J., MacDonald, A. S. The immunobiology of schistosomiasis. Nat. Rev. Immunol. 2, 499-511 (2002).
- Sandler, N. G. Global gene expression profiles during acute pathogen-induced pulmonary inflammation reveal divergent roles for Th1 and th2 responses in tissue repair. J. Immunol. 171, 3655-3667 (2003).
- Perrigoue, J. G. IL-31-IL-31R interactions negatively regulate type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 204, 481-487 (2007).
- Sandor, M., Weinstock, J. V., Wynn, T. A. Granulomas in schistosome and mycobacterial infections: a model of local immune responses. Trends Immunol. 24, 44-52 (2003).
- Nair, M. G. Alternatively activated macrophage-derived RELM-{alpha} is a negative regulator of type 2 inflammation in the lung. J. Exp. Med. 206, 937-952 (2009).
- Dalton, J. P. A method for the isolation of schistosome eggs and miracidia free of contaminating host tissues. Parasitology. 115, 29-32 (1997).
- Lewis, F. A. Large-scale laboratory maintenance of Schistosoma mansoni, with observations on three schistosome/snail host combinations. J. Parasitol. 72, 813-829 (1986).
- Tilney, N. L. Patterns of lymphatic drainage in the adult laboratory rat. J. Anat. 109 (Pt. 3), 369-383 (1971).
- Lewis, F., Coligan, J. E. Schistosomiasis. Current protocols in immunology. Chapter 19, Unit 19 (2001).
- Kaplan, M. H. Th2 cells are required for the Schistosoma mansoni egg-induced granulomatous response. J. Immunol. 160, 1850-1856 (1998).
- Wynn, T. A. Fibrotic disease and the T(H)1/T(H)2 paradigm. Nat. Rev. Immunol. 4, 583-594 (2004).
- Cheever, A. W. Variation of hepatic fibrosis and granuloma size among mouse strains infected with Schistosoma mansoni. Am. J. Trop. Med. Hyg. 37, 85-97 (1987).
