En utilisant des oeufs de<em> Schistosoma mansoni</em> En tant que<em> In vivo</em> Modèle de l'inflammation pulmonaire induite par les helminthes
Summary
Schistosoma mansoni oeufs sont des stimulateurs efficaces du type T auxiliaire 2 (Th2) la réponse immunitaire, caractéristique d'une infection parasitaire, l'asthme et l'inflammation allergique. Ce protocole utilise S. mansoni œuf d'injection afin de générer un taux de CD4 Th2 induite par les cytokines réponse inflammatoire dans les poumons, caractérisée par la formation de granulomes pulmonaires autour de l'oeuf, l'éosinophilie et l'activation des macrophages alternative.
Abstract
Schistosomes sont schistosomes qui infectent environ 200 millions de personnes dans le monde 1. Dans l'infection chronique à Schistosoma, l'une pathologie grave, y compris la fibrose du foie et de la splénomégalie, est causée par la réponse immunitaire à des œufs de parasites plutôt que le parasite lui-même 2. Œufs de parasites induisent une réponse Th2 caractérisée par la production d'IL-4, IL-5 et IL-13, l'activation alternative des macrophages et le recrutement des éosinophiles. Ici, nous décrivons l'injection d'œufs de Schistosoma mansoni en tant que modèle pour examiner les réponses spécifiques du parasite cytokines Th2 dans les poumons et les ganglions lymphatiques drainant, la formation de granulomes pulmonaires entourant l'oeuf et l'inflammation des voies respiratoires.
Après une sensibilisation par voie intrapéritonéale et intraveineuse défi, S. oeufs mansoni sont transportés à travers le poumon des artères pulmonaires où ils sont piégés dans le parenchyme du poumonpar les granulomes composés de lymphocytes, les éosinophiles et les macrophages activés alternativement 3-6. Associé à la formation de granulomes, de l'inflammation dans les espaces broncho-alvéolaires, l'expansion des ganglions lymphatiques drainant et l'activation des cellules CD4 T peut être observée. Ici, nous détaillons le protocole pour isoler Schistosoma mansoni oeufs à partir de foies infectés (modifié à partir de 7), la sensibilisation et difficile souris, et la récupération des organes (lavage broncho-alvéolaire (LBA), du poumon et les ganglions lymphatiques drainant) pour l'analyse. Nous incluons également histologique des données représentatives et immunologiques et des suggestions pour l'analyse immunologique supplémentaire.
Dans l'ensemble, cette méthode fournit un modèle in vivo pour étudier les réponses immunologiques induites par les helminthes dans le poumon, qui est largement applicable à l'étude des maladies inflammatoires, y compris Th2 infestation par les helminthes, les maladies fibrotiques, l'inflammation allergique et l'asthme. Avantages de ce modèle pour l'étude de type 2 l'inflammation dans les poumons comprennent la reproductibilité d'une puissante réponse inflammatoire Th2 dans les poumons et les ganglions lymphatiques drainant, la facilité de l'évaluation de l'inflammation par l'examen histologique des granulomes entourant l'œuf, et le potentiel de stockage à long terme du parasite oeufs.
Protocol
Discussion
Ici, un modèle utilisant de Schistosoma mansoni oeufs à induire une inflammation du poumon de type 2 est décrite. Les traits caractéristiques de ce modèle incluent le puissant réponse immunitaire de type Th2, inflammation des voies respiratoires et la formation de granulomes pulmonaires. Étant donné que ces paramètres dépendent des réponses des lymphocytes CD4 Th2 11, il s'agit d'un modèle utile pour étudier les effets des suppressions de protéines spécifiques ou de la lignée …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Ce travail a été soutenu par le National Institutes of Health (NIH) AI091759 et la maladie de Crohn et la colite Fondation de William de l'Amérique et Shelby Modell famille Bourse de recherche Fondation (à MN). Schistosome-souris infectées ont été fournis par le Centre de ressources Schistosome NIAID (NIAID contrat N01 A130026).
Materials
| Reagent | Size/Description | Company | Catalog # |
| Collagenase/Dispase | 500 mg | Roche Applied Science | 11 097 113 001 |
| Diff Quik Hema 3 Stain | Pack | Fisher Scientific Co. LLC | 122-911 |
| DMEM | Liquid | Gibco | 11965 |
| Falcon 50mL | Pack | Falcon | 352070 |
| Intramedic PE Tubing | 0.58 mm | Becton Dickinson and Co. | 427410 |
| Isoflurane | 250 mL | Abbot Animal Health | 52600405 |
| Ketamine | 100 mg/mL | Fort Dodge, Animal Health | N/A |
| Mannose receptor antibody | Biotin | AbD Serotec | MCA2235B |
| Metallic Strainer | Standard kitchen strainer | Target | Laurentiis |
| Paraformaldehyde | 16% | Electron Microsc. Sciences | 15710 |
| Penicillin/ Streptomycin | 100x | Gibco | 15070 |
| Percoll | 1 Liter | GE Healthcare Biosciences | 17 0891 01 |
| RELMα antibody | 50 μg | Peprotech | 500-P214 |
| Surgical Thread | 2.0 USP 100 yds | Surgical Specialties Corp. | SP118 |
| Syringe Needle | 23g, 3/4 inch | BD Vacutainer Lab. Med. | 305143 |
| USA Standard Testing Sieve | 150 μm, 0.0059″ | W.S. Tyler, Inc. | ASTME-11, Spec. No. 100 |
| Xylazine | 20 mg/mL | Butler | N/A |
References
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