高密度ヒト胚性幹細胞の培養線維芽細胞からの迅速な除去
Summary
遷移文化にフィーダーフリー条件への継続的な努力にもかかわらず、ヒト胚性幹細胞（hESCの）の導出と文化がマウス胚性フィーダー細胞（MEF）と共培養に大きく依存して残っている。ここでは、急速に、実験開始までにhESCの文化からフィーダを除去するための新規な方法を示しています。
Abstract
マウス胚線維芽細胞（MEF）は胚盤胞の分離1の後に、ヒト胚性幹細胞（hESC）文化を確立するために使用されていました。このフィーダシステムは、細胞膨張時に自発的分化を受けてからのヒトES細胞を維持しています。しかし、この共培養法は、労働集約的で高度に訓練された人材を必要とし、利回りが低いのhESC純度4。多くの研究室では、hESCの培養におけるフィーダー細胞の数（ すなわち、マトリックスコートディッシュや他のフィーダー細胞タイプ5-8を組み込む）を最小化しようとしました。これらの改変された培養系では、いくつかの約束を示しているが、hESCの文化の不要な自発的分化を遅らせるために、マイトマイシンC処理したマウスembyronic線維芽細胞とヒトES細胞を培養するための標準的な方法を取って代わられていない。したがって、hESCの拡張に使用されるフィーダー細胞は、分化実験中に除去されるべきである。いくつかの手法がhESCのCOを浄化するために利用可能であるがフィーダからlonies（FACS、MACS、または薬剤耐性ベクターの使用）は、これらの技術は、集中的な高価な、そして/またはhESCのに破壊的労働である。このプロジェクトの目的は、ヒトES細胞の純粋な人口の収穫を可能に精製する方法を考案しました。我々は、コンフルエントhESCの文化では、MEFの人口はMEFのシートの簡便かつ迅速な吸引を用いて除去することができることを観察した。この除去は、 "横細胞から細胞へのスチレン培養皿に低い結合親和性を持っているMEFの結合し、独自の生成中に線維芽細胞が外側にプッシュする幹細胞コロニーの能力など、いくつかの要因に依存していますニッチ "。 hESCの多能性は、その後の維持を確保するため、MEFを除去した後の10日に、SSEA-4、Oct3 / 4の発現およびTRA 1から81までを調べた。また、hESCのコロニーはhESCの拡張の追加レベルを提供し、MEFを除去した後に大規模な地層中への成長を続けることができました。
Protocol
Discussion
本稿で提示した方法は、ヒト胚性細胞培養物から線維芽細胞フィーダー細胞を除去するための迅速かつ安価な代替手段を提供しています線維芽細胞の除去に成功し、より長い幹細胞培養に発症、これらの細胞のコンフルエントな単層しっかりの存在に依存しています。 7-10日後に、成長のhESCコロニーはコロニー間のますます密線維芽細胞単層を生成し、外方向にフィーダー線維芽細胞をプッ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
この作品は、再生医療（RN2-00921から1）、およびNIHの資金国立研究賞（F32-HL104924）カリフォルニア工科大学から新しい教員賞IIによって賄われていた
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments (optional) |
| DDR2 | Santa Cruz | 7555 | Fibroblast Marker |
| Dapi | Calbiochem | 268298 | Cell Nucleus Marker |
| SSEA-4 | Millipore | MAB4304 | Human ESC Marker |
| Oct 3/4 | Santa Cruz | 9081 | Human ESC Marker |
| Flk-1 | BD Pharma | 555307 | Early Differentiation Marker |
| Tra-1-81 | Acris | AM20377AF4-S | Human ESC Marker |
Table 1. Table of specific reagents used for immunostaining the hESC.
References
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