Summary

ラット胚神経細胞の分離と文化:クイックプロトコル

Published: May 24, 2012
doi:

Summary

我々は、齧歯類の胚から海馬および皮質ニューロンを分離、培養するための迅速な方法論を記述します。このプロトコルは、私たちはほぼ純粋な神経細胞の培養が必要とされる実験を行うことができます。

Abstract

我々は、E15-17ラットの胚から海馬または皮質ニューロンを分離し、培養するための簡単​​な方法を記述しています。手順は、マウスとヒトの一次ニューロンと神経前駆細胞の分離に正常に適用することができます。解離ニューロンは、数週間に、無血清培地に維持されます。これらの培養物は、ヌクレオ、免疫細胞化学、核酸の調製と同様に、電気生理学的に使用することができます。古いニューロンの培養物は、またリン酸カルシウムや、リポフェクトアミンなどの脂質ベースの方法で、効率は低下し、レンチウイルス形質導入により効率の良いレートでトランスフェクトすることができます。

Protocol

1。ポリ-D-リジン(PDL):準備 1 mg / mlのストック溶液を得るためにPDLの5mgに無菌のddH 2 Oの5ミリリットルを追加します。 数回ピペッティングしてストック溶液を混ぜる。 すぐに使用するか、または2-8ポリ-D-リジン溶液℃で保存してください。 2。ポリ-D-リジン(PDL):コーティングプラスチック細胞培養皿滅菌のddH 2 Oで1…

Discussion

ここで説明したラット海馬および皮質ニューロンの解剖と文化の方法は化学的に定義された媒体( 図3)で成長し、ほぼ純粋な神経細胞の培養物を用いて実験を行うことができます。無血清培地で培養し、ほぼ純粋なニューロンのプロトコルは以前に2,3,4を説明してきたが、我々の方法で行われた重要な変更があります。従来のプロトコルから別の(すなわち、バンカー?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

我々は編集支援のためにJonnaエリスに感謝します。国立精神衛生研究所から:説明プロジェクトが受賞番号R01MH079751(F.ペルッツィPI)によってサポートされていました。内容はもっぱら著者の責任であり、必ずしも国立精神衛生研究所や国立衛生研究所の公式見解を示すものではありません。

Materials

Reagent Concentration
Neurobasal 98%
B27 2%
Glutamax 0.5 mM

Table I. Neurobasal/B27 complete medium.

Reagent Concentration
Glucose 16 mM
Sucrose 22 mM
HEPES 10 mM
NaCl 160 mM
KCl 5 mM
Na2HPO4 1 mM
KH2PO2 0.22 mM
Gentamicin 50 μg/ml
Fungizone 250 ng/ml
pH 7.4
Osmolarity 320-330 mOsm

Table II. Dissection medium.

Reagent Volume (μl)
Neurobasal/B27 complete medium 240
Trypan Blue Stain 0.4% 250
Total 490

Table III. 50x Counting solution.

Reagent Company Cat. number
Hibernate E Brainbits 767171
Neurobasal Gibco, Invitrogen 21103-049
B27 Gibco, Invitrogen 17504-044
Fungizone Gibco, Invitrogen 15290-018
Gentamicin sulfate Sigma Aldrich G1264
Glutamax 200 mM Gibco, Invitrogen 35050
TrypLE Express w/o phenol red Gibco, Invitrogen 12604
Cytosine-β-D-arabinofuranoside hydrochloride Sigma Aldrich C6645
Poly-D-Lysine Sigma Aldrich P6407
Laminin 1 mg/ml Millipore CC095
HEPES Sigma Aldrich H3375
Trypan Blue Stain 0.4% Gibco, Invitrogen 15250

Table IV. Specific reagents.

Equipment Company Cat. number
Stereo Microscope Olympus SZ61
Large Forceps FST 11022-14
Fine-tipped forceps Moria MC40B
Micro fine-tipped forceps Moria MC31
Razor-sharp scissors Roboz RS-6820
Micro Dissecting scissors FST 91460-11
Micro Dissecting Curved scissors FST 14067-11
Glass 2-chamber slides Lab-Tek 154461
60 mm dishes BD Falcon 353002
100 mm dishes Corning 430167
15 ml tubes BD Falcon 352099
1.5 ml cryo-tube vial Nunc 375353

Table V. Specific equipment.

References

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Cite This Article
Pacifici, M., Peruzzi, F. Isolation and Culture of Rat Embryonic Neural Cells: A Quick Protocol. J. Vis. Exp. (63), e3965, doi:10.3791/3965 (2012).

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