Мы описываем методологию быстрой, чтобы изолировать и культуры гиппокампе и коре нейроны от грызунов эмбрионов. Этот протокол позволяет проводить эксперименты, в которых почти чистой культуры нейронов не требуется.
Abstract
Мы описываем быстрый способ отделить и культуры гиппокампа и коры нейроны от E15-17 крысиных эмбрионов. Эта процедура может быть успешно применен для выделения мышиных и человеческих первичных нейронов и нейронных предшественников. Диссоциированных нейронов поддерживается в бессывороточной среде до нескольких недель. Эти культуры могут быть использованы для nucleofection, иммуноцитохимия, нуклеиновых кислот подготовки, а также электрофизиологии. Пожилые нейронов культуры можно трансфекции с хорошей скоростью эффективность лентивирусов трансдукции и менее эффективно, с фосфатом кальция или на основе липидов такие методы, как липофектамина.
Protocol
1. Поли-D-лизин (PDL): Подготовка Добавьте 5 мл стерильной DDH 2 O 5 мг PDL для получения маточного раствора 1 мг / мл. Смешайте маточного раствора с помощью пипетки несколько раз. Используйте сразу или хранить поли-D-лизин решения при температуре 2-8 ° C. 2. Пол?…
Discussion
Метод вскрытия и культуры гиппокампа крыс и корковых нейронов описаны здесь позволяет проводить эксперименты с использованием почти чистый нейронных культур, выращенных в химически определенной среде (рис. 3). Хотя протоколы для культивирования почти чистый нейронов в сывор?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Мы благодарим Jonna Ellis за помощь в редактировании. Проект описан была поддержана премии Количество R01MH079751 (PI: Ф. Перуцци) из Национального института психического здоровья. Содержания несут их авторы и не обязательно отражает официальную точку зрения Национального института психического здоровья и Национального института здоровья.