Analisi della maturazione polmonare delle cellule dendritiche e migrazione durante l'infiammazione allergica delle vie aeree
Summary
Descriviamo una strategia per monitorare la maturazione e la migrazione delle cellule dendritiche polmonari in risposta ovalbumina nel contesto di infiammazione delle vie aeree ovalbumina indotta allergica. Questa strategia può essere modificato per valutare la migrazione di cellule dendritiche in polmonari impostazioni di infezione.
Abstract
Le cellule dendritiche (DC) sono i principali attori coinvolti in avvio di risposta immunitaria adattativa mediante l'attivazione antigene-specifiche cellule T. DC sono presenti nei tessuti periferici in stato stazionario, ma in risposta alla stimolazione antigene, DC prendere l'antigene e migrare rapidamente i linfonodi drenanti dove iniziano risposta di cellule T contro il 1,2 antigene. Inoltre, DC svolgono un ruolo chiave nell'attivare autoimmune nonché allergica risposta immunitaria 3.
Dendritiche svolgono un ruolo essenziale nel sia all'inizio della risposta immunitaria e l'induzione di tolleranza nel contesto di ambienti polmone 4. Ambiente polmonare è largamente tollerogenica, a causa della esposizione vasta gamma di antigeni ambientali 5. Tuttavia, in alcuni individui vi è un'interruzione in tolleranza, che porta ad induzione delle allergie e asma. In questo studio, si descrive una strategia, che può essere utilizzato per monitorare la maturazione delle vie aeree DC e migrazione in risposta per l'antigene usato per la sensibilizzazione. La misurazione di maturazione delle vie aeree DC e migrazione permette di valutare la cinetica della risposta immunitaria durante infiammazione delle vie aeree allergica e aiuta anche a comprendere la grandezza della risposta immunitaria successivo insieme con i meccanismi sottostanti.
La strategia si basa sull'uso di ovalbumina come agente sensibilizzante. Ovalbumina indotta l'asma allergico è un modello ampiamente utilizzato per riprodurre l'eosinofilia delle vie aeree, l'infiammazione polmonare ed elevati livelli di IgE trovati durante l'asma 6,7. Dopo la sensibilizzazione, i topi sono sfidati con la consegna intranasale di ovoalbumina marcato con FITC, che permette di un'etichettatura specifica dei PVS delle vie aeree che ovoalbumine assorbimento. Successivamente, utilizzando diversi marcatori specifici DC, possiamo valutare la maturazione di queste cellule dendritiche e può anche valutare la loro migrazione verso i linfonodi che drenano impiegando la citometria a flusso.
Protocol
Discussion
Il metodo qui presentato offre un approccio basato citometria a flusso per l'analisi DC polmonari, sulla base di consegna di OVA-FITC per la sfida delle vie aeree. Questo consente il monitoraggio selettivo delle DC polmonari, che assorbono OVA-FITC e quindi le popolazioni DC, che sono monitorati sono effettivamente quelli che partecipano nella risposta immunitaria vie aeree durante il corso di OVA indotta infiammazione delle vie aeree allergica. In topi di controllo, in assenza di infiammazione delle vie aeree aller…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Questo lavoro è stato finanziato dalla CIHR e CF Canada concede al dottor Jim Hu e da una borsa di studio di dottorato assegnato a Rahul Kushwah da CF Canada.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Ovalbumin | Sigma-Aldrich | A5503 |
| Alum | Thermo Scientific | 77161 |
| OVA-FITC | Sigma-Aldrich | A9771 |
| Collagenase D | Roche | 11088858001 |
| Antibodies | e-Bioscience |
References
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