De base<em> Caenorhabditis elegans</em> Méthodes: Synchronisation et d'observation
Summary
La facilité de maintenir et de propager le nématode<em> C. elegans</em> Faire un organisme modèle agréable de travailler avec. La possibilité de synchronisation permet vers le travail avec une quantité importante de sujets au même stade de développement, ce qui facilite l'étude d'un processus particulier chez de nombreux animaux.
Abstract
La recherche sur la biologie moléculaire et du développement des nématode Caenorhabditis elegans a été commencé dans les années soixante-dix par Sydney Brenner et il a depuis été largement utilisé comme un organisme modèle 1. C. elegans possède des attributs clés tels que la simplicité, la transparence et cycle de vie court qui en ont fait un système expérimental adéquat pour les études biologiques fondamentales pour de nombreuses années 2. Découvertes dans ce nématode ont de larges implications car de nombreux processus cellulaires et moléculaires que le développement des animaux de contrôle sont évolutives 3 conservée.
Cycle de vie C. elegans passe par un stade embryonnaire et quatre stades larvaires avant que les animaux atteignent l'âge adulte. Le développement ne peut prendre de 2 à 4 jours selon la température. Dans chacune des étapes de plusieurs traits caractéristiques peuvent être observées. La connaissance de sa lignée cellulaire complète 4,5 avec le annotat profondeion de son génome tourner ce nématode dans un grand modèle dans des domaines aussi divers que la neurobiologie 6, le vieillissement 7,8, biologie des cellules souches 9 et la biologie de la lignée germinale 10.
Une fonctionnalité supplémentaire qui rend C. elegans un modèle intéressant à travailler avec la possibilité d'obtenir des populations de vers synchronisés à un stade précis grâce à un protocole relativement facile. La facilité de maintenir et de propager ce nématode a ajouté à la possibilité de synchronisation de fournir un outil puissant pour obtenir de grandes quantités de vers, qui peuvent être utilisés pour une grande variété de petites expériences ou à haut débit tels que des écrans ARNi, microarrays, séquençage massif, immunoblot ou hybridation in situ, entre autres.
En raison de sa transparence, C. structures elegans peuvent être distingués sous le microscope en utilisant la microscopie contraste interférentiel différentiel, aussi connu sous le nom micros Nomarskicopier. L'utilisation d'un liant l'ADN fluorescent, DAPI (4 ',6-diamidino-2-phénylindole), par exemple, peut conduire à l'identification spécifique et la localisation des cellules individuelles, ainsi que des structures subcellulaires et aux défauts qui leur sont associés.
Protocol
Discussion
Synchronisation des nématodes
Plusieurs solutions de blanchiment ont été décrits. Nous avons essayé cinq recettes différentes (tableau I) et, dans nos mains, ils n'ont pas montré de différences significatives dans la synchronisation des populations de vers (Fig. 1). Cependant, nos expériences montrent que fait paramètres tels que la température (Fig. 2), la solution de blanchiment rapport: le volume de vers (Fig. 3)</stro…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Les auteurs tiennent à remercier MICINN (programme de soutien de la ZEP Montserrat Porta de la Riva), AGAUR (Phd bourse à Laura Fontrodona), Instituto de Salud Carlos III (Miguel Servet programme de soutien à Julián Cerón), et Marie Curie IRG, ISCIII et IDIBELL pour le financement le laboratoire.
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