चूहा Splenocytes से टी सेल ग्रोथ फैक्टर की तैयारी
Summary
हम टी सेल विकास में विशिष्ट प्रतिजन चूहे टी लिम्फोसाइट लाइनों के इन विट्रो विस्तार के लिए इस्तेमाल किया कारक की तैयारी का वर्णन.
Abstract
प्रतिजन विशेष टी सेल संस्कृति में लाइनों या क्लोन के रखरखाव प्रतिजन प्रेरित सेल विस्तार 1,2 के चरणों द्वारा अलग सक्रियण के दौर की आवश्यकता है. 2 इंटरल्यूकिन के विस्तार के चरण के दौरान संस्कृति मीडिया के अलावा करने के लिए कोशिका मृत्यु को रोकने के लिए आवश्यक है और अल्पकालिक टी सेल लाइनों को बनाए रखने के लिए पर्याप्त है, लेकिन TH1 3 ध्रुवीकरण को बढ़ाने के लिए दिखाया गया है. 2 इंटरल्यूकिन की टी सेल विकास (TCGF) कारक है जो साइटोकिन्स का मिश्रण होता है द्वारा रिप्लेसमेंट अधिक 3 इन विट्रो में लंबी अवधि के टी सेल लाइनों को बनाए रखने में इंटरल्यूकिन दो से अधिक प्रभावी है. इसके अलावा, TCGF आसानी से प्रयोगशाला में बड़ी मात्रा में तैयार किया जा सकता है और पुनः संयोजक 2 इंटरल्यूकिन की तुलना में बहुत सस्ता है.
यहाँ, हम बताते हैं कैसे चूहे splenocyte संस्कृति supernatants से TCGF तैयार करने के लिए. इस प्रक्रिया के लिए, हम भोले लुईस thymus और रक्त संग्रह के लिए euthanized चूहों से spleens फसल. हम तैयार spleens से एकल कक्ष निलंबन, आसमाटिक सदमे से लाल रक्त कोशिकाओं lyze, और बीज संस्कृति माध्यम में splenocytes. कोशिकाओं concanavalin एक, एक mitogen है कि गैर चुनिंदा सभी चूहे टी lymphocytes सक्रिय साइटोकिन्स का उत्पादन उत्प्रेरण के साथ प्रेरित कर रहे हैं. संस्कृति supernantant 48 घंटे बाद एकत्र andexcess concanavalin अल्फा मिथाइल mannoside के लिए बाध्य है यह टी सेल लाइनों जो TCGF जोड़ा जाएगा को सक्रिय करने से रोकने के. TCGF तो बाँझ फ़िल्टर, aliquoted, और -20 डिग्री सेल्सियस पर संग्रहीत
Protocol
Discussion
हम TCGF लुईस चूहे splenocytes से तैयार के बाद से हम नियमित रूप से यह सीरम और thymi इन विट्रो में लुईस चूहे टी सेल लाइनों को प्रोत्साहित करने के लिए फसल तनाव से अनुभवहीन चूहों euthanize. इस TCGF के लिए और अन्य चूहा उपभेदों से टी सेल लाइन?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Materials
| Material Name | Type | Company | Catalogue Number | Comment |
|---|---|---|---|---|
| PBS, 1x, sterile | Reagent | Gibco / Invitrogen | 14040-182 | |
| Penicillin / Streptomycin 100x | Reagent | Sigma | P0781 | Add 5 ml of 100x solution to 500 ml PBS to prepare PBS-PS |
| Cell strainer, 70 um diameter | Tool | Fisher | 08-771-2 | |
| Ammonium Chloride (NH4Cl) | Reagent | Sigma | A0171 | Prepare a 0.15 M solution in sterile distilled water, keep cold |
| RPMI 1640 | Reagent | Gibco / Invitrogen | 21870-092 | |
| Fetal Bovine Serum (FCS, FBS) | Reagent | Gibco / Invitrogen | 16140-071 | Heat-inactivated |
| Penicillin / Streptomycin / L-Glutamine | Reagent | Cambrex / Biowhittaker | 17-718R | PSG |
| RPMI vitamins, 100x | Reagent | Sigma | R7256 | |
| Sodium pyruvate, 100x | Reagent | Sigma | S8636 | |
| Non-essential amino acids, 100x | Reagent | Sigma | ||
| Beta-mercaptoethanol | Reagent | Sigma | M7522 | |
| alpha methyl mannoside | Reagent | Sigma | M6882 | |
| Concanavalin A | Reagent | Sigma | M6882 |
References
- Beeton, C., Barbaria, J., Devaux, J., Benoliel, A. -. M., Gola, M., Sabatier, J. -. M., Bernard, D., Crest, M., Beraud, E. Selective blocking of voltage-gated K+ channels treats experimental autoimmune encephalomyelitis and inhibits T-cell activation. J. Immunol. 166, 936-944 (2001).
- Beeton, C., Wulff, H., Barbaria, J., Clot-Faybesse, O., Pennington, M., Bernard, D., Cahalan, M. D., Chandy, K. G., Beraud, E. Selective blockade of T lymphocyte K+ channels ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis, a model for multiple sclerosis. Proc. Natl. Acad. 98, 13942-13947 (2001).
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