Nous décrivons une<em> Ex vivo l'infection</em> Modèle pour la visualisation des interactions directes à partir de bactéries pathogènes avec les cellules humaines trompes de Fallope. Le modèle organe entier des tissus a été créée pour enquêter sur<em> C. trachomatis</em> Pathologie induite par le tube femelle Fallope sous la rubrique «la vie comme« conditions.
Les infections des voies génitales à Chlamydia trachomatis (C. trachomatis) sont les plus fréquentes transmises sexuellement maladie chez les femmes à travers le monde. Clairance inefficace ou la persistance des agents pathogènes peut conduire à des infections croissant de la partie supérieure du tractus génital et sont censés provoquer chronique inflammatoire des dommages à 1,2 tissus infectés. En conséquence, grave séquelle clinique comme la maladie inflammatoire pelvienne (PID), l'occlusion des trompes et de l'infertilité peut se produire 3,4.
La plupart des recherches en collaboration avec C. trachomatis a été réalisée dans des lignées cellulaires épithéliales (par exemple cellules HEp-2 et HeLa-229) ou chez les souris. Cependant, comme avec la cellule-culture à base de modèles, ils ne reflètent ni la physiologie du tissu natif, ni la physiopathologie de la C. infections du tractus génital trachomatis in vivo 5. D'autres limitations sont donnés par le fait que centrales cascades de signalisation (par exemple l'IFN-γ mediated signalisation JAK / STAT voie) qui contrôlent la croissance intracellulaire Chlamydia diffèrent fondamentalement entre les souris et les humains 6,7. Nous et d'autres a donc établi un modèle organe entier des trompes de Fallope pour étudier les interactions directes entre C. trachomatis et humaines des trompes de Fallope ex vivo des cellules 8,9.
A cet effet, l'homme des trompes de Fallope de la femme devant subir une hystérectomie ont été recueillis et infectés par le C. trachomatis sérovar D. Dans les 24 heures après l'infection, spécimen, analysés par microscopie électronique à balayage (MEB) et microscopie électronique à transmission (MET) pour détecter Chlamydia trachomatis médiation lésions épithéliales ainsi que C. la formation d'inclusion trachomatis dans le tissu de Fallope.
Visualisation de l'agent pathogène causée par des dommages au tissu infecté est ardu et souvent limitée à des procédures expérimentales chez la souris. Nous avons établi un modèle ex vivo l'infection dans les trompes de Fallope de l'homme pour analyser C. trachomatis des voies génitales supérieures. Par l'utilisation de cette méthode, nous étions en mesure de visualiser C. trachomatis – des lésions de l'épithélium du tube humaine Fallope dans l'jours après l'infection. Gonflement cellulaire et une lyse étaient des changements morphologiques typiques qui ont été observés en C. trachomatis – infectés trompes de Fallope, mais pas dans les contrôles non infectés. Analyses TEM a révélé que Chlamydia mettre en œuvre un cycle de type intracellulaire de développement dans les tissus infectés, montrant grosses inclusions avec re-différenciés des corps élémentaires, mais aussi les petites inclusions avec corps réticulés élargies qui pourraient indiquer la persistance. Cependant, l'image morphologique seule ne suffit pas à discriminer entre les replinfections intoxicantes et persistante, qui sont caractérisées par un métabolisme réduit et une résistance accrue aux antimicrobiens 10.
La destruction de l'épithélium des trompes de Fallope infectés est soit due à la perturbation de C. trachomatis – cellules épithéliales infectées après l'achèvement du cycle de développement intracellulaire et la libération de corps élémentaires infectieux ou la libération de cytokines pro-inflammatoires 8. Dommages aux tissus des agents pathogènes et l'hôte induite induits par les réactions immunitaires contre C. trachomatis sont censés être les principaux facteurs conduisant à la perte de la fonction des cellules épithéliales, fibroblastes remodelage et la stérilité tubaire, enfin in vivo 8,11.
Une des principales limites de ce modèle est l'absence de cellules inflammatoires qui entrave l'analyse des effets secondaires à l'initiale C. trachomatis de l'épithélium des trompes de Fallope. Cependant, le modèle est apappropriées afin de rechercher des conditions environnementales différentes (teneur en oxygène par exemple) et la première réponse immunitaire hôte à la phase aiguë C. trachomatis 8,9. D'autres plans sont d'établir un modèle pour les essais d'antimicrobiens contre C. trachomatis dans l'ensemble de l'homme des trompes de Fallope et de caractériser les états métaboliques des différents stades de développement observés dans l'épithélium des trompes par le 2-photons microscopie à balayage laser.
The authors have nothing to disclose.
Ce travail a été soutenu par la DFG-cluster d'excellence "inflammation aux interfaces" (RA-Si, RA-D). Nous sommes reconnaissants pour l'assistance technique excellent de Kristin Wischnat.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
DMEM | PAA | E15-843 | |
RPMI | PAA | R15-802 | |
FCS | PAA | A15-101 | |
Cycloheximide | Sigma – Aldrich | ||
SPG Buffer | various | see recipe below | |
Monti’s fixative | various | see recipe below | |
sodium cacodylate buffer | various | see recipe below | |
Richardson’s stain | various | see recipe below |
Recipes:
1. SPG Buffer
2. 0.1 M sodium cacodylate buffer, pH 7.35.
3. Monti’s fixative
4. Richardson’s stain