אוסף פרוטוקול לבלב אנוש
Summary
סרט הווידאו הזה מדגים הליך לנתיחה לעיבוד הלבלב האנושי לתוך תבניות אחסון מרובים. אוריינטציה אנטומי נשמר לאורך כל האזורים הלבלב כדי לאפשר הגדרת הרכב איון הצפיפות באזור.
Abstract
דיסקציה זה הליך הדגימה שפותח עבור רשת לעוגב תורמים הלבלב עם תוכנית (nPOD) סוכרת לתקנן הכנת הלבלב התאושש תורמי איברים מוות. הלבלב מחולק ל -3 אזורים עיקריים (ראש, גוף, זנב) ואחריו חלקים רוחביים סדרתי ברחבי המדיאלי על ציר לרוחב. חלקים מתחלפים משמשים פרפין קבוע בלוקים קפואים טריים דגימות שריד הם טחון עבור הצמד ההכנות מדגם קפואים, עם או בלי RNAse מעכבי, כי ה-DNA, RNA, או בידוד חלבון. המטרה הכללית של ההליך לנתיחה הלבלב הוא לדגום את הלבלב כולו, תוך שמירה על הכיוון אנטומי.
תא האנדוקרינית הטרוגניות מבחינת הרכב גודל איון,, ומספרים מדווח על איים אדם לעומת איים מכרסמים 1. רוב איים אדם מן הראש הלבלב, אזורי הגוף והזנב מורכבים containin אינסוליןגרם בטא תאים ואחריו פרופורציות נמוכות יותר של גלוקגון, המכיל אלפא-תאים ו somatostatin המכילים δ-תאים. פוליפפטיד המכיל תאים בלבלב PP ו גרלין המכילים תאים אפסילון גם כיום, אך במספרים קטנים. לעומת זאת, האזור מכיל אונקלי איים אשר מורכב ברובו פוליפפטיד המכיל תאים בלבלב עמ '2. אלה וריאציות אזוריות איון נובעים הבדלים התפתחותיים. הלבלב מתפתחת ניצנים הלבלב הגחון ועל הגב ב במעי הקדמי ואחרי סיבוב של הקיבה והתריסריון, המהלכים באונה הגחון ומתאחה עם הגב 3. האונה הגחון מהווה את החלק האחורי של הראש כולל את תהליך אונקלי בעוד האונה הגב מעורר שאר האיברים. וריאציה הלבלב האזורית מדווח גם באזור הזנב בעל צפיפות גבוהה יותר איון בהשוואה לאזורים אחרים באונה הגבית הנגזרות רכיבים שעברו ניוון סלקטיבית של סוכרת מסוג 1 <sאת> 4,5.
איברים ורקמות נוספות הם התאוששו לעתים קרובות התורמים איברים וכוללים הלבלב בלוטות לימפה, טחול שאינם הלבלב בלוטות הלימפה. דוגמאות אלה הם התאוששו עם תבניות דומות של הלבלב עם תוספת של בידוד של תאים cryopreserved. כאשר התריסריון הפרוקסימלי כלול הלבלב, רירית התריסריון ניתן לאסוף עבור חוסם פרפין קפוא ותכשירים הצמד טחון קפוא.
Protocol
Discussion
מטרת נוהל זה היא להגדיר עיבוד הלבלב הרגיל יכול להיות המתואמת פני אתרים מרובים איסוף ובכך לאפשר השוואה של התוצאות שהושגו על ידי קבוצות שונות. שיטת לנתיחה מבוסס על תקן נהלי הפתולוגיה כירורגית עם צעדים נוספים ביאור האזורים הלבלב העיקריים ואחריו התוך אזוריים יחידות משנ…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
המחברים מודים משפחות של תורמים איברים הרכש ארגונים העוסקים במחקר זה ומריה מרטינו ואירינה Kusmartseva לסיוע המומחה שלהם. עבודה זו מומנה על ידי Juvenile Diabetes Research Foundation (MC-T., MA) בתמיכה של רשת לעוגב תורמים הלבלב עם סוכרת.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
- Brissova, M. Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy. J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).
- Rahier, J. The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes. J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).
- Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development. J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).
- Wittingen, J., Frey, C. F. Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas. Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).
- Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. Cellular composition of the human diabetic pancreas. Diabetologia. 24, 366-371 (1983).
- Vaught, J. An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources. J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).
- Gianani, R. Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies. J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).
- Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hyöty, H. Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of β-cell autoimmunity. Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).
- In’t Veld, P. Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors. Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).
- Töns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans. Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).
