İnsan Pankreas için Toplama Protokolü
Summary
Bu video çoklu depolama biçimleri içine insan pankreas işlemek için bir diseksiyon yordam gösterir. Anatomik oryantasyon bölgesel adacık bileşimi ve yoğunluğu tanımı izin pankreas bölgeleri boyunca korunur.
Abstract
Bu diseksiyon ve örnekleme prosedürü kadavradan organ bağışında kurtarıldı pankreas hazırlanması standardize etmek Diyabet (nPOD) programı ile Pankreas Organ Bağış için Ağ için geliştirilmiştir. Pankreas yanal eksene medial boyunca seri enine kesitler ardından 3 ana bölgede (baş, gövde, kuyruk) ayrılmıştır. Alternatif bölümleri sabit parafin ve taze dondurulmuş blokları ve kalıntı numuneler için kullanılan DNA, RNA ve protein izolasyon için olan ya da olmayan RNAse inhibitörleri ya ek dondurulmuş Örnek preparatlar için kıyılmış edilir. Pankreas Diseksiyon işlemin genel amacı anatomik yönelimi korurken tamamını pankreas örneklemek etmektir.
Adacık bileşimi, büyüklüğü ve sayısı açısından Endokrin hücre heterojenitesini kemirgen adacıklar 1'e göre, insan adacıkları bildirilmektedir. Pankreas başı insan adacık çoğunluğu, vücut ve kuyruk bölgelerinde insülin containin oluşurg β-hücrelerinin düşük oranlarda takiben glukagon içeren α-hücreleri ve δ-hücreleri somatostatin-içeren. Pankreatik polipeptid içeren PP hücreleri ve ghrelin içeren epsilon hücreleri de mevcut fakat az sayıda bulunmaktadır. Bunun aksine, unsinat bölgesi esas pankreatik polipeptid içeren bir PP hücreleri 2 oluşan adacıklar içerir. Bu bölgesel farklılıklar adacık gelişimsel farklılıkları ortaya çıkar. Pankreas foregut ve mide ve onikiparmak bağırsağı, dorsal 3 ile ventral lobun hamle sigortalar ve dönüşten sonra ventral ve dorsal pankreas tomurcukları gelişir. Ventral lob dorsal lob organ kalanı yol açmaktadır ederken unsinat işlemi de dahil olmak üzere başının arka kısmını teşkil eder. Bölgesel farklar da pankreas kuyruk bölgesi, tip 1 diyabette selektif atrofi geçiren diğer bölge ve dorsal lob kaynaklı bileşenlerine kıyasla daha yüksek adacık yoğunluğuna sahip olan bildirilmektedir <skadar> 4,5.
Ek organ ve dokular genellikle organ bağışında kurtarıldı ve pankreatik lenf bezleri, dalak ve non-pankreatik lenf düğümleri içerir. Bu numuneler Kriyoprezerve hücrelerinin izolasyon ilavesi ile pankreas için de benzer biçimleri ile geri kazanılmaktadır. Proksimal duodenum, pankreas dahil edildiğinde, duodenal mukoza parafin ve dondurulmuş bloklar ve kıyılmış ek donmuş hazırlıkları için toplanmış olabilir.
Protocol
Discussion
Bu prosedürün amacı birden toplama siteler arasında uyumlu olabilir standart bir pankreas işleme tanımlamak ve böylece farklı gruplar tarafından elde edilen sonuçları karşılaştırabilme sağlamaktır. Diseksiyon yöntemi bölge-içi alt bölümleri tarafından takip başlıca pankreas bölgelerin açıklama için ek adımlar ile standart cerrahi patoloji uygulamalarına dayanmaktadır. Biospecimen işleme yöntemlerinin standartlaştırılması, Ulusal Kanser Enstitüsü 6 ulusal biobanking kuru…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Yazarlar, donörlerin aileleri ve uzman yardımı için bu araştırma ve Maria Martino ve Irina Kusmartseva yer Organ İhale Organizasyonlar teşekkür ederim. Bu çalışma Diyabet ile Pankreas Organ Bağış için Ağ destek Juvenil Diyabet Araştırma Vakfı (MC-T., MA) tarafından finanse edildi.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Dissection instruments including scalpels with 22 blades | Various | Various | |
| Centrifuge tubes (15 and 50 ml) | Fisher Scientific | 05-539-5, 430828 | Sterile |
| Cryotubes(1.8 ml) | VWR North America | 89004-300 | Sterile, bar codes optional |
| RNAlater | Ambion | AM7021 | |
| Surgical Pathology Ink | |||
| Cassettes | Mercedes Medical | CAS ECO109 | |
| 10% Neutral Buffered Formalin | Fisher Scientific | 23-245-685 | |
| OCT Freezing Media | TissueTek | 4583 | |
| Molds | ThermoScientific | 58952 | Various sizes |
| Isopentane | Fisher Scientific | O3551-4 | OCT chilling bath |
| Dry ice | OCT chilling bath | ||
| Liquid nitrogen in Dewar flask | Snap freezing cryovials | ||
| Cell culture dish (100mm) | Corning | 430167 | Sterile |
| Hyclone DMEF | ThermoScientific | SH30023.01 | Sterile, store refrigerated, glutamine included |
| Fetal Bovine Serum | Cellgro | 35-010-CV | Sterile, store frozen aliquots |
| Penicillin/Streptomycin/Antifungal | GIBCO | 15240-062 | Sterile, store frozen aliquots |
| Type 9 Paraffin | Richard-Allan Scientific | 8337 | |
| 1X D-PBS | GIBCO | 14190-144 | Sterile |
| 16% Paraformaldehyde | EM Sciences | 15710 | Make fresh, store refrigerated |
| 8% Glutaraldehyde | EM Sciences | 16019 | Make fresh, store refrigerated |
| Biosafety Level 2 hood | Various | ||
| Ultra-low freezer | Various | ||
| Sakura Cassette Printer | Sakura | ||
| Sakura VIP300 | Sakura | Automatic paraffin processor | |
| Paraffin Embedding Station | ThermoFisher |
Table 1. Specific reagents and equipment.
References
- Brissova, M. Assessment of human pancreatic islet architecture and composition by laser scanning confocal microscopy. J. Histochem. Cytochem. 53, 1087-1097 (2005).
- Rahier, J. The pancreatic polypeptide cells in the human pancreas: the effects of age and diabetes. J. Clin. Endocrinol. Metab. 56, 441-444 (1983).
- Uchida, T., Takada, T., Ammori, B. J., Suda, K., Takahashi, T. Three-dimensional reconstruction of the ventral and dorsal pancreas: a new insight into anatomy and embryonic development. J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 6, 176-180 (1999).
- Wittingen, J., Frey, C. F. Islet concentration in the head, body, tail and uncinate process of the pancreas. Ann. Surg. 179, 412-414 (1974).
- Rahier, J., Goebbels, R., Henquin, J. Cellular composition of the human diabetic pancreas. Diabetologia. 24, 366-371 (1983).
- Vaught, J. An NCI perspective on creating sustainable biospecimen resources. J. Natl. Cancer Inst. Monogr. 42, 1-7 (2011).
- Gianani, R. Initial results of screening of nondiabetic organ donors for expression of islet autoantibodies. J. Clin. Endocrinol. Metab. 91, 1855-1861 (2006).
- Tauriainen, S., Salmela, K., Rantala, I., Knip, M., Hyöty, H. Collecting high-quality pancreatic tissue for experimental study from organ donors with signs of β-cell autoimmunity. Diabetes Metab. Res. Rev. 26, 585-592 (2010).
- In’t Veld, P. Screening for insulitis in adult autoantibody-positive organ donors. Diabetes. 56, 2400-2404 (2007).
- Töns, H. A., Terpstra, O. T., Bouwman, E. Heterogeneity of human pancreata in perspective of the isolation of the islets of langerhans. Transplant Proc. 40, 367-369 (2008).
