Наш протокол был разработан для чисто и легко доставить островков или клеток под капсулу почки мышей. Клетки сосредоточены в гранулы в финале трубы используются для пересадки клеток под почечную капсулу. Простота этой техники уменьшает стресс на клетки и мыши.
Abstract
Наш протокол был разработан для чисто и легко доставить островков или клеток под почечную капсулу с диабетом или нормальных мышей. Мы обнаружили, что легче было сосредоточиться островков или клеток в гранулы в финале трубы доставки (PE50), используемых для трансплантации клеток под почечную капсулу. Эта технология обеспечивает скорость и легкость при одновременном снижении каких-либо необоснованных стресса клеток или мыши.
Загрузка: Установившаяся, собирается вручную, островков или гранулированные клетки тщательно атмосферный со дна 1,5 мл микроцентрифужных трубки использованием P200 pipetteman и прямо, тонкостенных пипетки. Длина трубы PE50 прилагается к пипетки с помощью небольшого адаптера трубки силикона. Клетки разрешено поселиться в наконечнике, а затем передаются на PE50 трубки медленным набора pipetteman. Как только клетки ближе к концу PE50 труб, излом сделано и силиконовые трубки адаптера находится над изломом. PE50 трубка передается 15 мл коническую содержащие сократить 5 мл пипетки и PE50 трубы выявляется через борт 5 мл пипетки для предотвращения скручивания во время центрифугирования. Клетки позволило достичь 1000 оборотов в минуту и остановился.
Пересадка: Получатель мышей под наркозом, побрился, и чистить. Небольшой надрез на левом фланге мыши и почки подвергаются. Почек, жир и ткани влажной с физиологическим раствором тампоном. Дистального конца PE50 прилагается на диске шприц винтом Гамильтон, содержащие кончика пипетки, с помощью трубки силиконовые адаптера. Небольшой ник делается на правую сторону фланга почек, не слишком большим, ни слишком глубоко. Скошенный конец PE50 труб, ближайшей клетки, осторожно помещают под капсулой, труба двигался осторожно, чтобы освободить место в то время как моечные физиологического раствора, сухих капсула может порваться легко. Небольшой пузырек воздуха поставляется под капсулу медленно набора дисков шприц винт. Островки затем медленно доставляются за воздушный пузырь. Как только островки были доставлены почек гомеостаз поддерживается и безделушки является обезболивающий укол с малым тепловыделением. Почка помещается обратно в полости и брюшину и кожа зашивается и сшиваются. Мыши сразу получавших Flunixin и бупренорфин кв и помещен в клетку на грелку.
Protocol
Подготовка островков для трансплантации (Tx) Под инвертированного микроскопа, самостоятельно выбрать островков использованием P200 pipetman и прямой наконечник пипетки из культурных островков в 100 мм пластины. Граф островков 100 по времени и передаче в каждую микроцентрифужных тр?…
Discussion
Этот протокол обеспечивает практичный и эффективный вариант для чисто и легко доставки островков или клеток под почечную капсулу с диабетом или нормальных мышей. Техника концентрации и гранулирования островков или клеток в окончательном трубы доставки (PE50), используемых для трансплантации клет…
Acknowledgements
UCSF Центра Диабета. NIH UCSF DERC Островок Core. JDRF. LifeScan ООО Джонсон & Джонсон компании.
Szot, G. L., Koudria, P., Bluestone, J. A. Transplantation of Pancreatic Islets Into the Kidney Capsule of Diabetic Mice. J. Vis. Exp. (9), e404, doi:10.3791/404 (2007).