Coloration immunohistochimique de B7-H1 (PD-L1) sur la paraffine Diapositives de tissus adénocarcinome pancréatique
Summary
B7-H1 (PD-L1) et sa liaison au PD-1 fournissent une importante induite par la tumeur de signal immunosuppresseur dans le micro de la tumeur. Une technique de coloration immunohistochimique pour caractériser l'expression et la localisation de B7-H1 dans l'adénocarcinome pancréatique est décrite ici.
Abstract
B7-H1/PD-L1, un membre de la famille B7 du système immunitaire réglementaires protéines de surface cellulaire, joue un rôle important dans la régulation négative des réponses à médiation cellulaire immunitaire grâce à son interaction avec son récepteur, la mort programmée-1 (PD -1) 1,2. La surexpression de B7-H1 par les cellules tumorales a été observée dans un certain nombre de cancers humains, y compris le mélanome, le glioblastome et les carcinomes du poumon, du sein, du côlon, de l'ovaire, et des cellules rénales, et a été montré pour affecter anti-tumorales T- 3-8 immunité cellulaire.
Récemment, B7-H1 expression par les tissus adénocarcinome pancréatique a été identifié comme un marqueur pronostique potentiel de 9,10. De plus, le blocage de B7-H1 dans un modèle murin de cancer du pancréas a été montré pour produire une réponse anti-tumorale 11. Ces données suggèrent l'importance de la B7-H1 comme une cible thérapeutique potentielle. Anticorps blocus anti-B7-H1 sont donc l'objet d'essais cliniques pour le mulsieurs tumeurs solides humaines, y compris le mélanome et le cancer du poumon, du côlon, du rein, de l'estomac et du pancréas 12.
Pour finalement être en mesure d'identifier les patients qui bénéficieront de B7-H1 ciblage des thérapies, il est essentiel d'étudier la corrélation entre l'expression et la localisation de B7-H1 et la réponse du patient au traitement avec des anticorps blocus B7-H1. Examiner l'expression de B7-H1 dans les tissus humains adénocarcinome pancréatique par immunohistochimie vous donnera une meilleure compréhension de la façon dont cette molécule de signalisation co-inhibiteur contribue à la suppression de l'immunité anti-tumorale dans le micro de la tumeur. L'anticorps anti-B7-H1 monoclonal (clone 5H1) développé par Chen et ses collègues a été montré pour produire des résultats fiables dans cryosections coloration de plusieurs types de tissus humains néoplasiques 4,8, mais des taches sur paraffine diapositives a été un défi que récemment 13-18. Nous avons devenfuie le protocole de coloration B7-H1 pour les diapositives inclus en paraffine des tissus adénocarcinome pancréatique. Le protocole de coloration B7-H1 décrit ici produit conforme coloration membranaire et cytoplasmique de B7-H1 avec petit retour en arrière.
Protocol
Representative Results
Discussion
La coloration immunohistochimique de B7-H1 sur cryocoupes a été rapporté dans les études antérieures pour une variété de cancers 3,4. Cependant, cliniques échantillons tumoraux sont généralement disponibles que sous la forme de blocs de paraffine. L'anticorps monoclonal 5H1 a plus récemment été appliquée avec succès à la coloration des tissus tumoraux inclus en paraffine y compris le carcinome à cellules rénales, cancer du col, cancer de la vessie et le mélanome 13-18. B7-H1 …
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
EB, KMB, et HX contribuent à parts égales. Cette étude a été financée par le NCI SPORE de cancers gastro-intestinaux P50 CA062924, CA148964 NIH K23, Lustgarten Foundation, Viragh Fondation, le Prix du jeune chercheur ASCO, NIH 5T32 CA0090701-28 Subvention de formation, Sol Goldman Centre cancer du pancréas, de la Fondation nationale du pancréas.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
| Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
| Block ACE | Serotec | BUF029 | |
| Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
| Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
| TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
| Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
| 190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
| 200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
| Xylene | VWR | 95057-827 | |
| Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
| Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
| Coverslips | Corning | 2940-245 | |
| Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
| Table 1. Reagents and equipment. |
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