Immunhistochemische Färbung von B7-H1 (PD-L1) auf Paraffin-embedded Slides der Pankreaskarzinom Tissue
Summary
B7-H1 (PD-L1) und seine Bindung an PD-1 einen großen tumorinduzierte immunsuppressiven Signal in Mikroumgebung des Tumors. Eine immunhistochemische Färbetechnik, die Expression und Lokalisation von B7-H1 in Pankreaskarzinom zu charakterisieren ist hier beschrieben.
Abstract
B7-H1/PD-L1, ein Mitglied der B7-Familie von immunregulatorische Zelloberflächenproteinen, spielt eine wichtige Rolle bei der negativen Regulation von zellvermittelten Immunantworten durch seine Wechselwirkung mit seinem Rezeptor, programmierten Zelltod-1 (PD -1) 1,2. Überexpression von B7-H1 durch Tumorzellen wurde in einer Reihe von menschlichen Krebsarten, einschließlich Melanom, Glioblastom und Karzinomen der Lunge, Brust, Dickdarm, Eierstock und Nierenzellen bemerkt worden, und wurde gezeigt, dass anti-Tumor-T beeinträchtigen Zell-Immunität 3-8.
Vor kurzem hat B7-H1 Expression von Pankreaskarzinom Geweben als potentieller prognostischer Marker 9,10 identifiziert worden. Zusätzlich hat Blockade von B7-H1 in einem Mausmodell von Bauchspeicheldrüsenkrebs gezeigt worden, um eine Anti-Tumor-Antwort 11 zu erzeugen. Diese Daten legen nahe, wie wichtig B7-H1 als ein potenzielles therapeutisches Ziel. Anti-B7-H1-Blockade Antikörper sind daher in klinischen Studien für die mul geprüfttiple humanen soliden Tumoren wie Melanomen und Karzinomen der Lunge, Dickdarm, Niere, Magen und Bauchspeicheldrüse 12.
Um schließlich in der Lage sein, um die Patienten, die von B7-H1 Targeting-Therapien profitieren zu identifizieren, ist es wichtig, den Zusammenhang zwischen Expression und Lokalisation von B7-H1 und Ansprechen des Patienten auf die Behandlung mit B7-H1-Blockade Antikörper zu untersuchen. Untersuchen der Expression von B7-H1 in menschlichen Pankreaskarzinom Gewebe durch Immunhistochemie wird ein besseres Verständnis, wie diese mit-inhibitorische Signalmolekül trägt zur Unterdrückung der Antitumor-Immunität in Mikroumgebung des Tumors. Die Anti-B7-H1-Antikörper (Klon 5H1) von Chen und Mitarbeitern entwickelt wurde gezeigt, zuverlässig Färbeergebnisse in Kryoschnitten mehrerer Arten von menschlichen neoplastischen Geweben 4,8 zu produzieren, aber auf Anfärben Paraffin eingebetteten Folien war eine Herausforderung, bis kürzlich 13-18. Wir haben developed die B7-H1 Färbeprotokoll für Paraffin eingebettete Folien Pankreaskarzinom Gewebe. Die B7-H1 Färbeprotokoll hier beschriebenen konsistente membranöse und zytoplasmatische Färbung von B7-H1 mit wenig Hintergrund.
Protocol
Representative Results
Discussion
Immunhistochemische Färbung von B7-H1 auf Kryoschnitten In früheren Studien wurde für eine Vielzahl von Krebsarten 3,4 gemeldet. Jedoch klinischen Tumorproben üblicherweise nur in Form von in Paraffin eingebetteten Blöcke verfügbar. Die monoklonalen Antikörper 5H1 hat neuerdings erfolgreich an die Färbung von Paraffin eingebettet Tumorgeweben einschließlich Nierenzellkarzinom, Gebärmutterhalskrebs, Blasenkrebs und Melanom 13-18 angewandt. B7-H1 Färbung auf Paraffin eingebettete, 9,1…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
EB, KMB und HX tragen gleichermaßen. Diese Studie wurde von der NCI SPORE in Gastrointestinal Cancers P50 CA062924, NIH K23 CA148964, Lustgarten Foundation, Viragh Foundation, ASCO Young Investigator Award, NIH 5T32 CA0090701-28 Training Grant, Sol Goldman Pancreatic Cancer Center und National Pancreas Foundation unterstützt.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
| Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
| Block ACE | Serotec | BUF029 | |
| Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
| Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
| TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
| Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
| Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
| 190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
| 200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
| Xylene | VWR | 95057-827 | |
| Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
| Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
| Coverslips | Corning | 2940-245 | |
| Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
| Table 1. Reagents and equipment. |
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