B7-H1 (PD-L1) og dens binding til PD-1 gi et stort tumorindusert immunsuppressivt signal i svulsten mikromiljøet. En immunhistokjemisk farging teknikk for å karakterisere uttrykk og lokalisering av B7-H1 i bukspyttkjertelen adenokarsinom er beskrevet her.
B7-H1/PD-L1, et medlem av familien av B7 immun-regulerende celle-overflateproteiner, spiller en viktig rolle i den negative regulering av celle-medierte immunresponser gjennom et samspill med sin reseptor, programmert død-1 (PD -1) 1,2. Overuttrykte B7-H1 av tumorceller har blitt bemerket i en rekke humane kreftformer, inkludert melanom, glioblastoma, og karsinomer i lunge, bryst, tykktarm, eggstokk og renale celler, og har vist seg å påvirke anti-tumor-T- celle immunitet 3-8.
Nylig har B7-H1 uttrykk ved bukspyttkjertelen adenokarsinom vev blitt identifisert som en potensiell prognostisk markør 9,10. Tillegg har blokade av B7-H1 i en musemodell av bukspyttkjertelkreft vist seg å produsere en anti-tumorrespons 11. Disse dataene antyder viktigheten av B7-H1 som et potensielt terapeutisk mål. Anti-B7-H1 blokade antistoffer derfor blir testet i kliniske studier for multiple menneskelige solide tumorer inkludert melanom og kreft i lunge, tykktarm, nyrer, mage og bukspyttkjertel 12.
For til slutt kunne identifisere de pasientene som vil dra nytte av B7-H1 målretting terapi, er det avgjørende å undersøke sammenhengen mellom uttrykk og lokalisering av B7-H1 og pasientens respons på behandling med B7-H1 blokade antistoffer. Undersøke uttrykk for B7-H1 i menneskelig bukspyttkjertelen adenokarsinom vev gjennom immunhistokjemi vil gi en bedre forståelse av hvordan dette samarbeidet hemmende signalering molekyl bidrar til undertrykkelse av antitumor immunitet i svulsten mikromiljøet. Den anti-B7-H1 monoklonalt antistoff (klon 5H1) utviklet av Chen og medarbeidere har vist seg å produsere pålitelig flekker resultater i cryosections av flere typer humane neoplastiske vev 4,8, men misfarging på parafin-embedded lysbilder hadde vært en utfordring til nylig 13-18. Vi har devrømte B7-H1 farging protokoll for parafin-embedded lysbilder av bukspyttkjertelen adenokarsinom vev. B7-H1 flekker protokollen beskrevet her produserer konsekvent membran og cytoplasmisk farging av B7-H1 med litt bakgrunn.
Immunhistokjemisk farging av B7-H1 på cryosections har blitt rapportert i tidligere studier for en rekke kreftformer 3,4. Men kliniske tumorprøver vanligvis er bare tilgjengelig i form av parafin-embedded blokker. Den 5H1 monoklonalt antistoff har mer nylig blitt brukt til farging av parafin innebygde tumorvev inkludert nyrecellekarsinom, cervical carcinoma, blærekreft og melanom 13-18. B7-H1 flekker på parafin-embedded 9,19 eller kryostaten 20 deler av bukspyttkjertelen a…
The authors have nothing to disclose.
EB, KMB, og HX bidrar like mye. Denne studien ble støttet av NCI SPORE i gastrointestinal kreft P50 CA062924, NIH CA148964 K23, Lustgarten Foundation, Viragh Foundation, ASCO Young Investigator Award, NIH 5T32 CA0090701-28 Opplæring Grant, Sol Goldman Bukspyttkjertelkreft Center, og National Pancreas Foundation.
Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
CSA System | Dako | K1500 | Includes the following reagents mentioned in the protocol: peroxidase block, streptavidin-biotin complex, amplification reagent, streptavidin-HRP, and DAB substrate and chromogen |
Avidin/Biotin Blocking Kit | Vector | SP-2001 | |
Block ACE | Serotec | BUF029 | |
Biotin anti-mouse IgG1 | BD | 553441 | |
Mouse IgG1 K Isotype Control | eBioscience | 14-4714-85 | |
TBS(Tris-buffered saline), 10X | Cellgro | 46-012-CM | 10xTBS contains 80 g/L NaCl and 24.2 g/L Tirs; Diluted to 1X with ddH2O for washes; |
Tween 20 | Sigma-Aldrich | P1379 | 1 ml added to 1 L of 1X TBS to make TBST |
Target Retrieval, 20x | Celerus Wave | 014-3000-000 | Diluted to 1x with ddH2O |
190 Proof Ethyl Alcohol | Pharmco-Aaper | 111000190 | |
200 Proof Ethyl Alcohol | Pharmo-Aaper | 111000200 | |
Xylene | VWR | 95057-827 | |
Hematoxylin | Richard-Allan Scientific | 72804 | |
Cytoseal 60 | Richard-Allan Scientific | 8310-4 | |
Coverslips | Corning | 2940-245 | |
Humidity chamber | Sigma | H6644 | |
Table 1. Reagents and equipment. |