Isolation von Lymphozyten mit der Miltenyi MACs Kit ist eine zuverlässige Methode, um Zellen aus ganzen lymphatischen Gewebe-Homogenaten zu reinigen. Cells unter Verwendung der Miltenyi-System sind in der Regel ≥ 96% rein. Hier zeigen wir, welche Schritte unternommen wurden, um CD4 + T-Zellen, einer der vielen Kits von Miltenyi angeboten isolieren.
Abstract
Isolierung von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in viele weitere komplexe Protokolle. Miltenyi bietet Kits, um Zellen aus verschiedenen Organismen einschließlich des Menschen, nicht-menschlichen Primaten, Ratten-und, wie wir hier beschreiben, Mäuse zu isolieren. Magnetic Bead-basierten Zellseparation können entweder für eine positive Selektion (oder Zell-Depletion) sowie negative Selektion. Hier zeigen wir, negative Selektion von unberührter oder na ve CD4 + T-Helferzellen. Mit diesem Standard-Protokoll haben wir in der Regel zu reinigen Zellen, die ≥ 96% reine CD4 + / CD3 + sind. Dieses Protokoll ist in Verbindung mit dem Protokoll Dissection und 2-Photonen-Imaging der peripheren Lymphknoten in Mäusen in Heft 7 des Jupiter veröffentlicht, für die Reinigung von T-Zellen und anderen Zelltypen zu adoptiv für bildgebende Zwecke übertragen werden. Obwohl wir nicht zeigen, FACS-Analyse in diesem Protokoll video, ist es dringend empfohlen, die gesamte Reinheit der isolierten Zellen mit den entsprechenden Antikörpern via FACS überprüfen. Darüber hinaus zeigen wir die nicht-sterile Methode der T-Zell-Isolierung. Wenn sterile Zellen für Ihre Endbenutzer-Anwendung benötigt werden, sollten Sie alle bewiesen Verfahren in der Gewebekultur Haube unter Standard-sterilen Bedingungen zu tun. Wir danken Ihnen für das Ansehen und viel Glück mit Ihrem eigenen Experimenten!
Protocol
Bitte lesen und befolgen das Protokoll in der Miltenyi-Kit oder online unter einbezogen http://www.miltenyibiotec.com/ .
Discussion
Isolierung von Zellen aus der Primärquelle ist ein notwendiger Schritt in viele weitere komplexe Protokolle. Miltenyi bietet Kits, um Zellen aus verschiedenen Organismen einschließlich des Menschen, nicht-menschlichen Primaten, Ratten-und, wie wir hier beschreiben, Mäuse zu isolieren. Magnetic Bead-basierten Zellseparation können entweder für eine positive Selektion (oder Zell-Depletion) sowie negative Selektion. Hier zeigen wir, negative Selektion von unberührter oder na ve CD4 + T-Helferzellen. Mit diesem Standard-Protokoll haben wi…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Wir wollen Rebecca Paquett für die Herstellung von MACS-Puffer zu danken.
Materials
Material Name
Type
Company
Catalogue Number
Comment
MACS Buffer
Reagent
None
None
Prepare as described by Miltenyi.
CD4+ T cell Isolation Kit: Untouched Isolation
Reagent
Miltenyi
130-090-860
For use with the Miltenyi system.
Sterile Phosphate-Buffered Saline (PBS)
Reagent
For use in the preparation of MACS buffer.
Corning 35mm Not TC-Treated Culture Dish
기타
Corning Cell Culture Surfaces
430588
Used in the preparation of a single cell suspension.
70 micron Cell Strainer
Tool
BD Falcon
352350
Used in the preparation of a single cell suspension.
6 mL Syringe
Tool
Tyco Healthcare
8881516051
Used in the preparation of a single cell suspension.
Matheu, M. P., Cahalan, M. D. Isolation of CD4+ T cells from Mouse Lymph Nodes Using Miltenyi MACS Purification. J. Vis. Exp. (9), e409, doi:10.3791/409 (2007).