Summary

एक कम मृत्यु चूहा प्रायोगिक subarachnoid नकसीर के के बाद विलंबित सेरेब्रल Vasospasm का आकलन मॉडल

Published: January 17, 2013
doi:

Summary

Aneurysmal subarachnoid hemorrhage (SAH) is bleeding that occurs into the subarachnoid space when an aneurysm ruptures. While the morbidity and mortality from this event has been on a decline due to improved treatment approaches, the risk of vasospasm after subarachnoid hemorrhage continues to be the same as it was several years ago. The importance of establishing a comprehensive and reproducible animal model to identify initiating events of cerebral vasospasm has been the focus of research since the first use of rats in an experimental vasospasm model in 1979 by Barry et al. Early work in rats demonstrated that a single injection of autologous blood into the cisterna magna led to acute (within minutes) but not delayed cerebral vasospasm 3, 6, 14. Here we characterize a low mortality SAH rat model that results in reproducible delayed vasospasm.

Abstract

उद्देश्य: विशेषताएँ और योग्य मॉडल है कि चूहों में aneurysmal subarachnoid नकसीर (SAH) के बाद देरी मस्तिष्क vasospasm दर्शाता है, क्रम में की शुरुआत की घटनाओं, pathophysiological परिवर्तन और उपचार के लिए संभावित ठिकानों की पहचान की स्थापना.

तरीके: अट्ठाईस पुरुष Sprague-Dawley चूहों (250 – 300 ग्राम) – SAH या खारा नियंत्रण मनमाने ढंग से दो समूहों में से एक के लिए सौंपा गया. SAH समूह (एन 15 =) में चूहा subarachnoid नकसीर ऑटोलॉगस रक्त की डबल इंजेक्शन द्वारा प्रेरित किया गया था, 48 घंटा अलावा महाकुण्ड में. इसी तरह, सामान्य नमक (n = 13) खारा नियंत्रण समूह की महाकुण्ड में इंजेक्ट किया गया था. चूहे पांच दिन पर 2 रक्त इंजेक्शन के बाद बलिदान किया गया और दिमाग histological विश्लेषण के लिए संरक्षित किया गया. vasospasm की डिग्री आधारी धमनी के वर्गों का उपयोग आंतरिक luminal क्रॉस अनुभागीय NIH छवि जम्मू सॉफ्टवेयर का उपयोग कर क्षेत्र को मापने के द्वारा मापा गया था. महत्व थाTukey / Kramer 'सांख्यिकीय विश्लेषण का उपयोग कर परीक्षण किया.

परिणाम: histological वर्गों के विश्लेषण के बाद, आधारी धमनी luminal पार अनुभागीय क्षेत्र खारा समूह में से SAH में छोटे, पूर्व समूह में मस्तिष्क vasospasm के साथ संगत थे. SAH समूह में, आधारी धमनी आंतरिक क्षेत्र (0.056 ± सुक्ष्ममापी 3) 2 रक्त इंजेक्शन (सात दिनों प्रारंभिक रक्त इंजेक्शन के बाद) के बाद पांच दिनों vasospasm से काफी छोटे थे, आंतरिक क्षेत्र के साथ खारा नियंत्रण समूह (0.069 ± 3, पी 0.004 =). वहाँ मस्तिष्क vasospasm से कोई मौत थे.

निष्कर्ष: चूहे डबल SAH मॉडल एक हल्के, survivable, आधारी धमनी vasospasm कि एक छोटे पशु मॉडल में मस्तिष्क vasospasm pathophysiological तंत्र का अध्ययन करने के लिए इस्तेमाल किया जा सकता है लाती है. एक कम और स्वीकार्य मृत्यु दर एक महत्वपूर्ण कसौटी के लिए एक आदर्श SAH पशु मॉडल के लिए संतुष्ट किया जा इतना है कि vasospasm के तंत्र elucid हो सकता हैated 7, 8. मॉडल के आगे संशोधन vasospasm और तंत्रिका विज्ञान की परीक्षा की वृद्धि की गंभीरता के लिए समायोजित करने के लिए किया जा सकता है.

Protocol

1. SAH विषय के लिए चूहा सर्जरी 0.15 मिलीलीटर रक्त ऑटोलॉगस धमनी इंजेक्शन के साथ चूहे anesthetized 0.1 मिलीग्राम / / Ketamine Xylazine कृंतक कॉकटेल किलो का उपयोग कर और 5 मिनट के लिए बैठने की अनुमति दी है. पर्याप्त संज्ञाहरण पि?…

Representative Results

ऊपर वर्णित प्रोटोकॉल के भीतर, वहाँ कई कदम है कि हमें विश्वास है कि क्या पहले साहित्य में वर्णित किया गया है की तुलना में एक मॉडल के बेहतर लक्षण वर्णन की आवश्यकता होती हैं. यहाँ हम कदम है कि आवश्यक हैं क्र?…

Discussion

Primates, एक अधिक समान आनुवंशिक संरचना और शारीरिक विशेषताओं होने मानव, और अधिक बारीकी से देरी मस्तिष्क vasospasm की घटनाओं की नकल और अधिक आसानी से 8 कृन्तकों से धमनी परिवर्तन की निगरानी के लिए गैर इनवेसिव इमेज?…

Disclosures

The authors have nothing to disclose.

Acknowledgements

हम उसे बहुमूल्य जानकारी के लिए इस पांडुलिपि के लिए लिखने में डॉ. मैरी Lou Vallano, तंत्रिका विज्ञान और शरीर विज्ञान के विभाग के प्रयासों को स्वीकार करना चाहते हैं.

Materials

Name of equipment / reagent Company Catalogue Number
Male SD rats (250-300 g) Taconic SD-M
26 G Catheters Webster 8416683
25 G Needles Buffalo 305122
1 cc Syringes Central stores 54245
Ketamine/Xylazine cocktail Animal Care (SUNY)*
Betadine Central stores 51458
Sucrose Sigma S9378-1kg
Paraformaldehyde Sigma P6148-500G
Phosphate buffer solution Fisher BP-399-4
Surgical Table Harvard PY2 72-2590
OCT Compound (cryoprotection) VWR 25608-930
Superfrost Slides Fisher 12-550-15

* Synthesized at Department of Laboratory Animal Care, SUNY Upstate Medical University. Add 1 cc [100 mg/ml] of Xylazine to 10 ml [100 mg/ml] of Ketamine.

References

  1. Bederson, J. B., Germano, I. M., Guarino, L. Cortical blood flow and cerebral perfusion pressure in a new noncraniotomy model of subarachnoid hemorrhage in the rat. Stroke. 26, 1086-1091 (1995).
  2. Cheng, G., Wei, L., Zhi-Dan, S., Shi-Guang, Z., Xiang-Zhen, L. Atorvastatin ameliorates cerebral vasospasm and early brain injury after subarachnoid hemorrhage and inhibits caspase-dependent apoptosis pathway. BMC Neurosci. 10, 7-17 (2009).
  3. Jackowski, A., Crockard, A., Burnstock, G., Russell, R. R., Kristek, F. The time course of intracranial pathophysiological changes following experimental subarachnoid hemorrhage in the rat. J. Cereb. Blood Flow Metab. 10, 835-849 (1990).
  4. Kaoutzanis, M., Yokota, M., Sibilia, R., Peterson, J. W. Neurologic evaluation in a canine model of single and double subarachnoid hemorrhage. J. Neurosci. Methods. 50, 301-307 (1993).
  5. Karaoglan, A., Akdemir, O., Barut, S., Kokturk, S., Uzun, H., Tasyurekli, M., Colak, A. The effects of resveratrol on vasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage in rats. Surg. Neurol. 70, 337-343 (2008).
  6. Lee, J. Y., Huang, D. L., Keep, R., Sagher, O. Characterization of an improved double hemorrhage rat model for the study of delayed cerebral vasospasm. J. Neurosci. Methods. 168, 358-366 (2008).
  7. Lee, J. Y., Sagher, O., Keep, R., Hua, Y., Xi, G. Comparison of experimental rat models of early brain injury after subarachnoid hemorrhage. Neurosurgery. 65 (2), 331-343 (2009).
  8. Megyesi, J. F., Vollrath, B., Cook, D. A., Findlay, J. M. In vivo animal models of cerebral vasospasm: a review. Neurosurgery. 46, 448-460 (2000).
  9. Prunell, G. F., Mathiesen, T., Diemer, N. H., Svendgaard, N. A. Experimental subarachnoid hemorrhage: Subarachnoid blood volume, mortality rate, neuronal death, cerebral blood flow, and perfusion pressure in three different rat models. Neurosurgery. 52, 165-176 (2003).
  10. Prunell, G. F., Mathiesen, T., Svendgaard, N. A. Experimental subarachnoid hemorrhage: Cerebral blood flow and brain metabolism during the acute phase in three different models in the rat. Neurosurgery. 54, 426-436 (2004).
  11. Ryba, M. S., Gordon-Krajcer, W., Walski, M., Chalimoniuk, M., Chrapusta, S. J. Hydroxylamine attenuates the effects of simulated subarachnoid hemorrhage: implication for the role of oxidative stress in cerebral vasospasm. Neurol. Res. 31, 195-199 (1999).
  12. Satoh, M., Parent, A. D., Zhang, J. H. Inhibitory effect with antisense mitogen-activated protein kinase oligodeoxynucleotide against cerebral vasospasm in rats. Stroke. 33, 775-781 (2002).
  13. Suzuki, H., Kanamaru, K., Tsunoda, H., Inada, H., Kuroki, M., Sun, H., Waga, S., Tanaka, T. Heme oxygenase-1 gene induction as an intrinsic regulation against delayed cerebral vasospasm in rats. J. Clin. Invest. 104, 59-66 (1999).
  14. Swift, D. M., Solomon, R. A. Subarachnoid hemorrhage fails to produce vasculopathy or chronic blood flow changes in rats. Stroke. 19, 878-882 (1988).
  15. Vatter, H., Weidauer, S., Konczalla, J., Dettmann, E., Zimmermann, M., Raabe, A., Preibisch, C., Zanella, F., Seifert, V. Time course in the development of cerebral vasospasm after experimental subarachnoid hemorrhage: clinical and neuroradiological assessment of the rat double hemorrhage model. Neurosurgery. 58, 1190-1197 (2006).
  16. Veelken, J. A., Laing, R. J., Jakubowski, J. The Sheffield model of subarachnoid hemorrhage in rats. Stroke. 26, 1279-1283 (1995).
  17. Zubkov, A. Y., Nanda, A., Zhang, J. H. Signal transduction pathways in cerebral vasospasm. Pathophysiology. 9, 47-61 (2003).
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Cite This Article
Dudhani, R. V., Kyle, M., Dedeo, C., Riordan, M., Deshaies, E. M. A Low Mortality Rat Model to Assess Delayed Cerebral Vasospasm After Experimental Subarachnoid Hemorrhage. J. Vis. Exp. (71), e4157, doi:10.3791/4157 (2013).

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