야생 유충에서 Hemocytes을 추출하기위한 간단한 프로토콜
Summary
곤충 hemocytes는 곤충 개발의 모든 단계에 걸쳐 면역 및 비 면역 모두 여러 중요한 기능을, 실시합니다. hemocyte 유형 및 기능의 현재 우리의 지식은 곤충 유전자 모델에 대한 연구에서 비롯됩니다. 여기, 우리는 추출 정량화과 야생 유충에서 hemocytes을 시각화하는 방법을 제시한다.
Abstract
곤충 hemocytes은 (포유류의 백혈구에 해당) 곤충의 수명주기에 걸쳐 한 여러 생리적 과정에 중요한 역할을한다. Lepidoptera (나방과 나비)와 Diptera (진정한 파리)의 주문에 속하는 곤충의 애벌레의 단계에서 hemocytes은 림프의 선 (전문 조혈 장기) 또는 배아 세포로부터 형성되어 성인 무대에를 통해 수행 할 수 있습니다. 배아 hemocytes는 염증이 기간 동안 개발과 chemotaxis 규정 동안 세포 이주에 참여하고 있습니다. 또한 세포 apoptosis에 참여하고 embryogenesis 2 필수적입니다. Hemocytes는 세포 확산, 세포 집합, nodules의 형성, phagocytosis 및 외국 침략자 3의 캡슐화와 같은 여러 기능을 포함하는 곤충 본래 면역 반응의 세포 팔을 중재. 그들은 같은 PR로도 감염시 특정 곤충 체액 방어에서 일을 꾸미고 책임이 있습니다항균 펩티드 및 기타 이펙터 분자 4, 5 oduction. Hemocyte 형태 및 기능은 주로 과일 파리, Drosophila melanogaster 6, 7, 모기 Aedes aegypti 및 아노펠레스 gambiae 8, 9, 담배 hornworm, Manduca sexta 10, 11을 포함, 유전자 또는 생리 곤충 모델에서 공부하고 있습니다. 그러나, 작은 정보는 현재 다양성, 분류, 형태, 특히 비 모델 곤충 종, 야생 12 일부터 수집 된 사람들의 hemocytes의 기능에 대해 존재합니다.
여기 야생 유충에서 hemocytes를 추출하기위한 간단하고 효율적인 프로토콜을 설명합니다. 우리는 어미에서 두 번째의 음절 instar Lithacodes fasciola (노란색 어깨 슬러그 나방) (그림 1)과 Euclea delphinii (가시 오크 총알) 유충을 (Lepidoptera : Limacodidae)를 사용하여 보여주고 hemolymph의 충분한 볼륨 (곤충 혈액)격리 및 hemocyte 번호는 개인 애벌레에서 계산 할 수 있습니다. 이 방법은 효율적으로 이러한 종뿐만 아니라 현장에서 수확 기타 관련 lepidopteran의 유충에 hemocyte 유형을 공부하는 데 사용할 수 있습니다, 또는 그것은 쉽게 미생물 또는 기생 생물 13 감염에 따라 hemocyte 기능을 조사하기위한 면역 assays과 함께 사용할 수 있습니다.
Protocol
Representative Results
Discussion
의학적으로 중요한 곤충 lepidopteran 모델 곤충에서 hemocytes를 추출하기위한 방법은 이전 9, 14보고되었습니다. Hemocyte 추출 방법은 곤충 종에 따라 조정되며, 곤충 및 형태학의 기능의 발달 단계. 예를 들어, Manduca의 애벌레에서 hemolymph 절연은 쉽게 복부 15의 끝 부분 곡선 경적을 snipping 의해 수행 할 수 있습니다. 슬러그 유충 (Limacodidae)이 복부 구조를 부족하기 때문에, 우리는 ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
TMS는 본 연구 기간 동안 할란 신뢰 휄로 십 (GWU)에서 지원되었습니다. 필드 컬렉션에 대한 자금 및 L.를 양성 fasciola와 E. delphinii는 JTL에 NSF 부여 DEB 0,642,438에 의해 제공되었다.
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| Micropipette puller | Sutter Instruments | P-1000 | |
| Borosilicate glass tubes | Sutter Instruments | B100-50-10 | OD: 1.0, ID: 0.50 mm |
| Grace’s Medium | Sigma | G8142 | |
| Fetal Bovine Serum | Thermo Fisher Scientific | SH3007102 | Heat inactivated |
| Dumont #5 Forceps | Fine science tools | 11252-40 | |
| Neubauer hemocytometer | Hausser Scientific | 3200 | |
| Plastic tubing | Tri-Tech | TT-3-32OD | OD: 3/32”, ID: 1/32′ |
| Glass medical syringe | Fortuna Optima | D-97877 | 50 ml volume |
| Blunt end needle | Small Parts | NE-162PL-25 | 16 Gauge x 1″ length |
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