Upprätta en ortotopisk modell blåsa tumören för att utvärdera antitumöreffekter av intravesikalt levererat Särna och övervakning tumörtillväxt genom ultraljud och självlysande bilder.
Abstract
Vi presenterar ett nytt förfarande för behandling av blåscancer med intravesikalt levereras liten aktiverande RNA (Sarna) i en ortotopisk xenotransplantat mus blåsan tumörmodell. Den musmodell fastställs genom urinröret kateterisering i inhalerade narkos. Kemisk brännskada införs sedan till blåsan slemhinna under användning av intravesikalt silvernitratlösning att störa skiktet blåsan glykosaminoglykan och tillåter celler att fästa. Efter flera tvättar med sterilt vatten, blåscancer hos människa KU-7-luc2-GFP celler instilleras genom katetern in i blåsan för att verka i 2 timmar. Efterföljande tillväxt av tumörer i urinblåsan bekräftas och övervakas av in vivo urinblåsan ultraljud och självlysande bilder. Tumörerna behandlas sedan intravesikalt med Sarna formulerat i lipid nanopartiklar (LNPs). Tumörtillväxten övervakas med ultraljud och bioluminiscens. Alla steg i detta förfarande är visat på bifogade videon.
Protocol
Förfaranden som inbegriper djurförsök har godkänts av Institutional Animal Care and Use Committee (lACUC) vid University of California, San Francisco. 1. Cellberedning Den humana cancer i urinblåsan cellinje KU-7-luc2-GFP (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA) odlas i RPMI-1640 medium kompletterat med 10% fetalt bovint serum och 50 | ig / ml gentamicin. Kulturerna upprätthölls vid 37 ° C, 5% CO2 med mediet ändras var två till tre dagar. Cel…
Discussion
Vi presenterar ett protokoll för upprättandet av en mus ortotopisk xenograft urinblåsan tumörmodellen följt av intravesikal behandling av tumörer med LNP formulerade Sarna som riktar initiativtagaren till p21 CIP1/WAF1 (p21) för transkriptionsaktivering. 2, 3 De resulterande tumörer kan vara bekräftas och övervakas med självlysande avbildning och urinblåsa ultraljud. Ortotopisk modell kan vara överlägsen intraperitoneal, subkutan eller intravenösa modeller genom att tillhandahålla e…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
Denna forskning finansieras av AACR Henry Shepard urinblåsan Cancer Research Grant (09-60-30-LI).
Kang, M. R., Yang, G., Charisse, K., Epstein-Barash, H., Manoharan, M., Li, L. An Orthotopic Bladder Tumor Model and the Evaluation of Intravesical saRNA Treatment. J. Vis. Exp. (65), e4207, doi:10.3791/4207 (2012).