区分功能基因表达的作用，通过骨髓移植免疫和非免疫细胞在小鼠结肠炎
Summary
骨髓移植提供了一种方法来改变的骨髓衍生细胞的基因型。如果感兴趣的基因的表达在两个骨髓来源的细胞和非骨髓来源的细胞，骨髓移植可以改变到一个不同的基因型的骨髓来源的细胞，不改变非骨髓来源的细胞的基因型。
Abstract
要了解结肠炎的发展中的一个基因的作用，我们比较了野生型小鼠的反应和兴趣基因缺陷的基因敲除小鼠结肠炎。如果该基因的利益是表示在两个骨髓来源的细胞和非骨髓来源的细胞的主机，但是，它是可能的感兴趣的基因的骨髓来源的细胞和非骨髓分化的作用衍生骨髓细胞移植技术。要改变的骨髓细胞基因型的小鼠，原来的受体小鼠的骨髓被破坏的照射，然后更换新的捐赠者的骨髓不同基因型。当野生型小鼠供体骨髓移植到基因敲除小鼠中，我们可以产生与野生型的骨髓来源的细胞中的基因表达的基因敲除小鼠。或者，基因敲除小鼠时，供体骨髓移植到无利益基因表达的野生型受体小鼠，野生型小鼠从骨髓衍生细胞。然而，骨髓移植可能不是100％完成。因此，我们利用集群的分化（CD）分子（CD45.1和CD45.2）作为供体和受体细胞的标记，跟踪捐赠者的骨髓来源细胞在受体小鼠的骨髓移植成功的比例。 CD45.1 CD45.2基因型的基因型和基因敲除小鼠与野生型小鼠。受体小鼠的照射后，供体骨髓细胞注入受体小鼠不同基因型。当新的骨髓再生接管其免疫，将小鼠用化学剂（硫酸葡聚糖钠，DSS 5％）的挑战，以诱发大肠炎。在这里，我们还表明，该方法诱导结肠炎的小鼠的骨髓来源的细胞从表达感兴趣的基因的作用的评价。如果该基因的利益从骨来源的细胞的疾病的发展中起着重要的作用（如大肠杆菌炎），骨髓移植的受体小鼠的表型可以显着改变。结肠炎实验结束时，骨髓来源的血液和骨髓中的细胞进行标记与抗CD45.1和CD45.2和其定量的存在比例可用于骨髓移植的成功，通过流式细胞术评价。应显示成功的骨髓移植供体基因型在长期的CD分子标记对收件人基因型的受体小鼠的骨髓和血液中的绝大多数。
Protocol
Representative Results
Discussion
骨髓移植的方法是适用于免疫学研究的结肠炎，感染，癌症，肥胖症和其他疾病的。基因的利益时，需要在两个骨髓来源的和非骨髓来源的细胞和基因的利益被怀疑由细胞介导疾病无论从人口表示这骨髓移植实验。例如，抗菌肽抗菌肽调节急性结肠炎。但是，它是表示在两个上皮细胞和免疫细胞（如巨噬细胞）。然后，我们用骨移植来定义人口的细胞调节小鼠急性肠炎。结肠炎的严重程度显着改?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
这项工作是由加州大学洛杉矶分校的治疗中心，克罗恩病和结肠炎基金会美国职业发展奖（2691）和国立卫生研究院NIDDK K01（DK084256）的资金就围冠试点和可行性研究的资助。
伯纳德·莱文和Scott厨房加州大学洛杉矶分校艾滋病研究鼠/人嵌合体的核心设施中心的协助下照射骨髓操作。流式细胞仪操作协助加州大学洛杉矶分校矢量的核心设施。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number |
| Cell staining buffer | Biolegend | #420201 |
| 10X RBC lysis buffer | Biolegend | #420301 |
| FITC mouse isotype control | Biolegend | #400207 |
| PE mouse isotype control | Biolegend | #400211 |
| PE anti-mouse CD45.2 | Biolegend | #109807 |
| FITC anti-mouse CD45.1 | Biolegend | #110705 |
| Anti-mouse CD16/32 blocking | Biolegend | #101301 |
| 40 μm cell strainer | Fisherbrand | #22363547 |
| PBS 1X | MP biomedicals | #1860454 |
| Heparin | Fisherbrand | #BP2425 |
| Sulfatrim (SMZ) | Qualitest | NC9242720 (fisher) |
| Lysol IC | Andwin Scientific | NC9745686 (fisher) |
| Vaccutainer | BD | #8000813 |
| Mouse restrainer | Braintree Scientific | #TV-150 |
| Irradiator | J.L. Shepherd and Associates | Mark I 68A |
| Flow cytometer | BD | BD FACSCanto II |
| Flow cytometer test tube | Falcon | #352052 |
| Digital caliper | Fisherbrand | 14-648-17 |
| Hemoccult ICT | Beckman Coulter | G0328QW |
References
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