顆粒球に依存する自己抗体誘発皮膚水疱形成
Summary
VII型コラーゲンの200アミノ酸（aa 757から967）のストレッチに対してIgG抗体を精製し、我々の現在の仕事で説明する動物モデルで猛烈な表現型だけでなく、人間に特徴的な病理組織および免疫病理学的特徴を再現したマウスに繰り返し注入され後天性表皮水疱症（EBA）<sup> 1</sup>。
Abstract
自己免疫現象は、健康な個体で発生しますが、自己寛容が失敗したときに、自己免疫応答が特定の病状になることがあります。によるWitebskyのは、自己免疫疾患などの診断の基準のいずれかを仮定すると、自己抗体の受動的伝達によって、実験動物における疾患の再生です。後天性表皮水疱症（EBA）、皮膚や粘膜の原型の臓器特異的自己免疫疾患のために、いくつかの実験モデルは、最近設立された。 VII型コラーゲンの200アミノ酸（aa 757から967）のストレッチに対してIgG抗体を精製し、我々の現在の仕事で説明する動物モデルで猛烈な表現型だけでなく、人間に特徴的な病理組織および免疫病理学的特徴を再現したマウスに繰り返し注入されEBA 1。本格的な広範な疾患は、通常、最初の注射後5-6日見られ、疾患の程度は、投与されたCの線量と相関しているollagen VII-特異的IgG。実験EBAにおける組織損傷（ブリスター形成）-4組織結合自己抗体2によって顆粒球の動員および活性化に依存している。モデルは唯一の遠心性自己免疫応答のT細胞非依存位相を再現したがって、このモデルでは、自己免疫組織損傷に関与する顆粒球依存性炎症経路の解剖を可能にします。また、その値は、in vivoで自己抗体のブリスター誘導可能性を示すとEBA 1,3、-6における水疱形成のメカニズムを調査研究の数によって強調される。最後に、このモデルでは、大幅に自己抗体によって誘発される疾患における新たな抗炎症治療薬の開発を容易にするでしょう。全体的に、EBAの受動転送動物モデルがアクセス可能で有益な疾患モデルであると研究者はEBAの病因ではないだけを分析するのではなく、基本的な生物学的にも臨床的に答えるのに役立ちます本質的な自己免疫の質問。
Protocol
1。病原性抗体の作製注意：抗体は一晩0.1MグリシンpHは2.5から3（溶出バッファー）（ON）に格納されるべきではないとして精製と抗体の濃度は、同じ日に行われるべきである。 IgGのアフィニティー精製：免疫ウサギ血清25mlを使用します。 4でONウサギ血清を融解℃で、20℃で1xPBS（バッファを実行している）と、それを1:1で混合し、10分間1260 x…
Representative Results
マウスでは、本格的な疾患における抗原特異的抗体結果の受身伝達、臨床組織学的および免疫病理学的なレベルで人間EBA似ている。水疱、痂皮、びらん、脱毛症は、耳、鼻、足、脚、背中、マウスの目の周りに開発しています。病気の最初の臨床症状は、おそらく耳および/または頭部領域に表示されます。特定ウサギIgG、およびマウス補体C3の沈着は、IF病変部周囲の皮膚の凍結切片で真皮?…
Discussion
実験動物への自己抗体の受動的な転送は、その病原性7、-12を実証するための主要なアプローチです。この方法により得られた動物モデルは、自己免疫13の間接的な証拠であることに加えて、病原性機構の遠心性の相の調査を可能にします。後天性表皮水疱症（EBA）の膨れ抗体誘導性顆粒球依存皮膚の受動的伝達モデルは、自己免疫性皮膚疾患における組織損傷のメカ?…
Disclosures
The authors have nothing to disclose.
Acknowledgements
著者は、フライブルク大学（CSに）医学部からドイツ学術振興SI-1281/4-1とBIOSにからの補助金によって支援を認める。
Materials
| Name of the reagent | Company | Catalogue number | Comments |
| recombinant antigen | The plasmids encoding for the recombinant forms of murine collagen VII are available from the corresponding author. | ||
| immune rabbit serum | www.eurogentec.com | We had New Zealand White rabbits immunized with 200 μg of antigen, 3 times at 2 week intervals. For this purpose we have used the services of Eurogentec S.A., Belgium. | |
| Protein G agarose | Roche Applied Science | 11243233001 | |
| Balb/c mice | Charles River Laboratories | ||
| OCT compound, Tissue-Tek | Sakura Finetek | 4583 | OCT, optimal cutting temperature |
| Cryomold standard | Sakura Finetek | 4557 | 25 mm × 20 mm × 5 mm |
| Cryomold intermediate | Sakura Finetek | 4566 | 15 mm × 15 mm × 5 mm |
| Uni-Link-Einbettkassette | R. Langenbrinck | 09-0503 | Histology processing and embedding cassettes |
| Spezial-Tatowierfarbe Schwarz | H. Hauptnerund & Richard Herberholz GmbH & Co. KG | 71492000 | tattooing paste |
| Tatowierzange TZ1 | EBECO E. Becker & Co GmbH | tattooing device | |
| Heparin | Carl Roth GmbH & Co. | 7692.1 | |
| Formaldehyde 37% | Carl Roth GmbH & Co. | 7386 | |
| Ketamine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | K2753-1G | |
| Xylazine hydrochloride | Sigma-Aldrich Chemie GmbH | X1251-1G | |
| sterile PBS | Biochrom | L182-50 | |
| digital camera | Nikon | Coolpix 5400 | |
| Syringe driven filter unit 0.45 μm | Millipore | ||
| Caliper | Mitutoyo 7309 | 1667338 | Farnell (distributor) |
| disease scoring sheet | example enclosed |
References
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Granulocyte-dependentAutoantibody-inducedSkin BlisteringAutoimmune PhenomenaSelf-toleranceAutoimmune ResponseWitebsky’s PostulatesDiagnosing Autoimmune DiseasePassive Transfer Of AutoantibodiesEpidermolysis Bullosa Acquisita (EBA)Experimental ModelsCollagen VIIBlistering PhenotypeHisto- And Immunopathological FeaturesHuman EBAWidespread DiseaseDose Of Administered Collagen VII-specific IgGGranulocyte Recruitment And ActivationInflammatory Pathway
Cite This Article
Csorba, K., Sitaru, S., Sitaru, C. Granulocyte-dependent Autoantibody-induced Skin Blistering. J. Vis. Exp. (68), e4250, doi:10.3791/4250 (2012).